Некоторые этические вопросы технологии эмбриональных стволовых клеток
|
Словарь
Дифференцировка – необратимое развитие различий между изначально (у эмбриона первых стадий делений дробления) однородными клетками с образованием специализированных клеток, стадий и органов. Плюрипотентные (П) стволовые клетки (СК) – клетки, произошедшие от эмбриона ранних стадий развития, способные дифференцироваться в различные типы клеток, но не в эмбрион. ПСК мигрируют к местам своего конечного расположения, пролиферируют и дифференцируются в один из нескольких возможных типов коммитированных клеток. ПСК функционируют и во взрослом организме. Соматические клетки – клетки тела иные, чем половые (женские или мужские) клетки. Стволовые клетки (СК) – недифференцированные клетки, способные к самоподдержанию (самообновлению), к дифференцировке. Обладающие детерминацией – возможностью выбора направления дифференцировки. СК – гетерогенны, среди них имеются “транзитные” СК, находящиеся в процессе перехода в более дифференцированное состояние. СК функционируют в своем окружении – нише, исключающем дифференцирующее влияние, обеспечивающем длительную пролиферацию. Транзитные СК имеют меньший пролиферативный потенциал. Тотипотентные (Т) СК – клетки эмбриона ранних стадий дробления, имеющие неограниченные способности дифференцироваться в эмбрион, экстраэмбриональные оболочки и ткани, в любой тип клеток, тканей и органов организма. Трансгенный организм – в геном которого введена и экспрессируется экзогенная ДНК. Унипотентные СК – от которых дифференцируется только один тип клеток. Эмбриональные (Э) СК – примитивные клетки, возникающие в процессе развития эмбриона, из которых дифференцируются все типы клеток взрослого организма и которые при определенных условиях могут осуществить эмбриогенез . При изолировании от эмбриона и культивировании in vitro ЭСК сохраняют способность к самоподдержанию и дифференцировке. В данном обзоре обсуждается вопрос о тотипотентности и плюрипотентности эмбриональных клеток и не затрагивается проблема тоти- и плюрипотентности ядер, связанной с программированием. Репрограммирование генома клеточного ядра – отдельная биологическая проблема. Преимплантационное и первые этапы постимплантационного развития эмбриона человека Эмбриональное развитие человека можно разделить на два периода: 1) преимплантационное развитие, от момента оплодотворения до стадии бластоцисты (до 6 дня после оплодотворения); 2) постимплантационное развитие (от 6 дня до 40 нед беременности – до рождения). Оплодотворение происходит в период 24 ч после овуляции ооцита в верхнем отделе яйцевода; после чего в оплодотворенной яйцеклетке мужской и женский пронуклеусы сливаются; объединяются наборы хромосом от мужского и женского пронуклеусов. Формируется одноклеточная стадия эмбриона –-зигота. Затем зигота вступает в дробление посредством митотических делений. Первое дробление зиготы происходит в трубе матки примерно через 1,5–2,5 дня после оплодотворения (ПО). Формируется эмбрион человека на двухклеточной стадии, каждая из этих двух клеток (бластомеров) имеет равные потенции (т.е.тотипотентные) для развития в самостоятельный эмбрион. На 3–4-й дни ПО формируется морула – многоклеточная стадия. На всех этих стадиях ( до имплантации) эмбрион окружен неклеточной прозрачной мембраной, блестящей оболочкой. Полагают (для млекопитающих), что до 8-клеточной стадии бластомеры морфологически идентичны друг другу и являются тотипотентными, что проявляется в способности каждого из этих бластомеров формировать все типы клеток и тканей, дифференцироваться в эмбрион, его оболочки и ткани и в экстраэмбриональные оболочки. На 5-й день формируется бластоциста. Между бластомерами формируется полость (бластоцель), заполненная жидкостью. На одном из полюсов бластоцисты обособляется аггломерат клеток – внутренняя клеточная масса (ВКМ), снаружи формируется наружный одноклеточный слой бластоцисты - трофобласт (трофэктодерма). Этот этап означает первый признак появления двух различных клеточных типов развивающегося эмбриона человека: клетки трофобласта специализируются на выполнение трофической и имплантационной функции для эмбриона; клетки ВКМ содержат весь клеточный материал для развития собственно эмбриона [1, 6, 11, 23, 27, 28, 34]. Клетки ВКМ обладают плюрипотентностью: из них может сформироваться эмбрион, но они неспособны дать развитие плаценте и поддерживающим тканям (как это делает трофэктодерма). Однако высказываются и иные мнения [8, 35, 38, 41, 44, 45]. На 6-й день после оплодотворения эмбрион вылупляется из прозрачной оболочки , начинается его имплантация: формируются контакты клеток трофобласта с клетками матки, ее кровеносными сосудами, постепенно формируется плацента. К началу 2-й недели трофобласт становится двуслойным: внутренний – клеточный слой – цитотрофобласт, окружает ВКМ. Из наружного слоя формируется симпласт с многочисленными ядрами клеток. Клетки ВКМ преобразуются в двуслойный эмбриональный диск – эмбриобласт, зародышевой щиток. В нем различают эктодерму и энтодерму эмбриобласта. Из поверхностных разрозненных клеток ВКМ формируется внезародышевая мезодерма. Формирование примитивной энтодермы (гипобласта) осуществляется путем выселения отдельных клеток ВКМ вдоль стенки бластоцеля, из них развивается энтодерма желточного мешка, этот процесс означает 1-ю фазу гаструляции. Оставшиеся клетки ВКМ обозначаются как эпибласт. Затем эпибласт расщепляется и различают эмбриональный эпибласт (эмбриобласт) и клетки отщепляющегося эпибласта, формирующие стенку амниона (амниотическая эктодерма). Экстраэмбриональная энтодерма краями заворачивается внутрь и в конце концов края соединяются, формируя желточный мешок. Эмбриобласт со стороны контакта эмбриона с маткой покрыт полостью амниотического пузырька, а с противоположного полюса - полостью желточного мешка. Т.е. из эмбриобласта (эмбрионального эпибласта), локализованного между двумя полостями, формируется собственно клеточный материал всех трех зародышевых листков, будущих зачатков эмбриона [1, 6, 11, 23, 27, 28, 34]. В период 7–14 дней ПО имплантирующаяся бластоциста все глубже заключается в эндометрий матки. Во время гаструляции формируется полярность – переднезадняя ось эмбриона. На 15–16 дни происходит перемещение клеток наружного слоя эмбриобласта к его будущему заднему краю, формируется примитивная первичная полоска по средней линии диска. На переднем конце первичной полоски клеточное скопление формирует гензеновский узелок. Позже по продольной средней линии первичная полоска продавливается вглубь, образуется первичная бороздка. Клетки эмбриобласта, мигрирующие через первичную полоску и гензеновский узелок, формируют эмбриональную энтодерму и мезодерму, а также – нотохорд, интегрирующийся затем в энтодерму первичной кишки. Предшественники эктодермы локализованы впереди первичной полоски. Из энтодермы желточного мешка формируется зачаток кишки. В мезенхиме желточного мешка возникают первые кровяные островки, из которых формируются первые кровяные клетки и сосуды эмбриона. Примордиальные половые клетки (гоноциты) выявляются по наличию в них высокой активности щелочной фосфатазы у 15–20 дневных эмбрионов [9]. Полагают, что они возникают (обособляются) либо в эпибласте, либо в эмбриональной эктодерме и оттуда через энтодерму желточного мешка и эктодерму первичной кишки гоноциты мигрируют в область будущих зачатков гонад до 32 дня эмбриогенеза. Зачатки гонад (половые валики) у человека развиваются как индифферентные (бипотенциальные) образования на вентральной стороне мезонефроса (первичной почки) из мезотелия. Со стороны брюшной полости зачатки гонад покрыты висцеральным эпителием. Из клеток мезонефральной мезенхимы половых валиков развиваются будущие соединительнотканные и мышечные элементы гонад. Митотически делящиеся в зачатке гонад гоноциты и дифференцирующиеся из них гонии создают пул половых клеток [1, 6, 11, 27]. Эмбриональные стволовые клетки На ранних стадиях эмбрионального развития человека (как и млекопитающих животных) в эмбрионе возникают примитивные клетки, из которых развиваются все типы клеток взрослого организма. Эти клетки названы эмбриональными стволовыми клетками (ЭСК). Если их выделить из эмбриона и культивировать in vitro, они способны самообновляться (самоподдерживаться), продуцировать более дифференцированные дочерние клетки. Последние способны также дифференцироваться в разные типы клеток организма. Когда ЭСК находятся в культуре in vitro, из них возникают стволовые клетки тканей взрослого организма (кроветворные, линия половых клеток, мышечные, нервные, эпидермальные, интестинальные и др.) [4, 8, 15, 17, 20, 33, 35, 41, 44, 45]. В настоящее время выделение и манипулирование с ЭСК животных стало для ряда лабораторий рутинной процедурой исследования [4, 8, 15, 17, 20, 24, 35]. Чтобы поддерживать недифференцированный фенотип ЭСК при культивировании разработано использование клеточного – фидерного слоя. Как правило, в качестве фидерного слоя применяют первичные эмбриональные фибробласты или перевиваемые фибробласты (STO) мыши, митотически инактивированные гамма-излучением. Сохранение плюрипотентности ЭСК мыши в культуре (in vitro) достигается добавлением цитокинов. Клетки фидерного слоя продуцируют фактор/факторы, которые предохраняют дифференцировку и поддерживают пролиферацию ЭСК и их плюрипотентность [8,15,17]. В 1988 г.был изолирован и идентифицирован фактор, способный поддерживать активность фидерного слоя – лейкемию ингибирующий фактор (LIF). При его использовании ЭСК могут поддерживаться в культуре в отсутствии фидерного слоя. ЭСК, поддерживаемые в культуре, имеют тенденцию накапливать анеуплоидные клетки или клетки с иными ХА (3). СК детерминированы на асимметричное деление клеток, что приводит к формированию одной дифференцированной (прогенитор) дочерней клетки и другой дочерней клетки, которая является еще стволовой клеткой [15, 17, 23]. До настоящего времени имеются трудности четкого определения стволовых клеток и отсутствуют четкие критерии их идентификации [8, 33], также как и высказаны различные мнения о дефинициях тоти- и плюрипотентности ЭСК [8, 35, 38]. Первые два сообщения о выделении ЭСК из внутренней клеточной массы 3,5-дневной бластоцисты мыши появились в 1981 г. [21, 30]. Показано, что ядра клеток эмбрионов мышей теряют способность к тотипотентности в период от двух- до восьмиклеточной стадии [31]. Различают три типа ЭСК:1) ЭСК, полученные из внутренней клеточной массы предимплантационных эмбрионов млекопитающих животных; 2) примордиальные половые клетки эмбриона (ППКЭ) [8, 41]; 3) ЭСК, полученные из эмбриональных карцином млекопитающих животных [8]. Одним из свойств ЭСК является их способность участвовать в образовании разных типов клеток и тканей. При введении ЭСК в эмбрион (в полость на стадии бластоцисты или ранее) они включаются в эмбриональное развитие и могут принимать участие в формировании ряда тканей и органов химерного организма, в том числе – и линии половых клеток. На этой способности ЭСК основан один из методов создания химерных животных [4, 8, 15, 17]. Способность ЭСК, при введении их в полость бластоцисты , участвовать в формировании линии половых клеток позволяет использовать ЭСК в качестве носителей для введения экзогенных (чужеродных) генов и получение таким непрямым способом трансгенных животных [4, 8, 15, 17]. Одним из важных свойств ЭСК является способность к формированию особых клеточных пространственно хаотичных структур (образований) – эмбриоидных тел (ЭТ). ЭТ образуются при определенных условиях культивирования: при удалении из среды фактора ингибиции дифференцировки; при достижении определенной плотности клеток в культуре или при удалении фидерного слоя. В ЭТ нередко формируется полость (подобная таковой желточного мешка). При прикреплении к субстрату клетки ЭТ дифференцируются в различные типы клеток и тканей (крови, мышц, нервов, эпителии). При определенных условиях (подавление иммунитета) введение ЭСК животным приводит к формированию тератом, содержащих элементы различных дифференцированных тканей и СК [8, 15]. Система ЭСК/ЭТ может использоваться для изучения эмбриональной клеточной дифференцировки и нарушения этого процесса. Разработаны и используются методы переноса ядер ЭСК животных в зрелые энуклеированные яйцеклетки, например путем электрослияния кариопласта с энуклеированным ооцитом [46].Таким образом достигается получение клонированных организмов. В мире поддерживается несколько десятков стабильных линий ЭСК мыши, сохраняющих многие годы эмбриональный фенотип. Однако сохранение эмбрионального фенотипа является большой проблемой в технологии ЭСК, поскольку зависит от длительности культивирования клеток. Идентифицированы молекулы, которые поддерживают состояние ЭСК [8, 15, 17, 32, 33, 35]. В экспериментах с длительно-культивируемыми ЭСК свиньи, коровы и мыши было установлено, что одним из важных факторов успеха получения ЭСК является стадия преимплантационного развития, на которой выделяют ЭСК[2, 3]. В 1996 году Томсону с коллегами удалось получить 8 плюрипотентных клеточных линий из клеток бластоцисты обезьян. Две из восьми клеточных линий поддерживались в культуре клеток более года. Из этих линий формировались ЭТ при определенной плотности клеток. В отсутствии фидерного слоя при культивировании in vitro клетки дифференцировались в различные типы клеток [44]. Обобщение основных достижений в области ЭСК млекопитающих свидетельствует о перспективности их использования для решения ряда проблем биологии развития, биотехнологии, клеточной и молекулярной биологии, генной терапии. К таким фундаментальным проблемам относятся : проблема дифференцировки и морфогенеза в эмбриональном развитии, проблема генетической регуляции развития, механизмы канцерогенеза. ЭСК широко используются при генном таргетинге (для анализа роли определенных генов в процессе развития, с целью моделирования и корректирования наследственных заболеваний человека), при создании трансгенных животных. ЭСК являются источником тотипотентных ядер при клонировании животных. Отмечают перспективность использования ЭСК при замещении или восстановлении ткани, при генной терапии, при трансплантации ЭСК роговицы глаза, трансплантации эпидермиса и волосяных фолликулов и др. Создание ЭСК сельскохозяйственных животных имеет большое научное и экономическое значение и многолетний опыт исследований с ЭСК мыши вселяют надежду на успех использования ЭСК в этой области [2–4, 8, 15, 31, 33, 35, 42]. Использование ППКЭ является перспективным для решения многих фундаментальных и практических проблем, но пока технически трудно выполнимым (ИПС). Отмечается высокий риск аномалии развития реконструированной яйцеклетки, поскольку не исключена вероятность нарушения репрограммирования генома после введения в нее ядра соматической клетки [8, 41]. Накопленный опыт и определенные успехи фундаментального характера, достигнутые при работе с ЭСК млекопитающих животных делают возможным проанализировать достижения и недоработки в технологии ЭСК с целью использования ЭСК человека или отказа от этого направления по этическим соображениям. В ноябре 1998 года было опубликовано два сообщения о выделении ЭСК от эмбрионов и плодов человека [41, 45]. В одном из них [45] излагались результаты получения длительно поддерживаемых in vitro плюрипотентных ЭСК, выделенных из клеток ВКМ доимплантационных эмбрионов человека. Эти эмбрионы не были созданы специально для исследований. Их биологические родители дали согласие на их использование в исследованиях, поскольку эмбрионы остались незатребованными для терапии бесплодия и должны были по истечении срока криоконсервирования быть разрушенными [45]. Эти клеточные линии in vivo и in vitro могли дифференцироваться в различные типы клеток и тканей (производных от эктодермы, энтодермы и мезодермы). На их поверхности были идентифицированы маркеры, характерные для ЭСК. Из четырех линий клеток, трансплантированных мышам с супрессией иммунитета, развились тератомы [45]. Во втором сообщении излагалась информация о выделении ЭСК из области гонадного валика и мезентерия 5–8-недельных эмбрионов и плодов, полученных при искусственном прерывании беременности и использованных в исследовании с согласия родителей [41]. По пяти иммунологическим маркерам и положительной реакции клеток на щелочную фосфатазу они были охарактеризованы как ЭСК и ППКЭ. Многие из ППКЭ прошли 20–25 пассажей. Анализ сформированных ЭТ позволил установить, что клетки, произошедшие от ППКЭ, могли дифференцироваться в производные всех трех зародышевых листков [41]. Этические аспекты ТЭСК Эти две работы вызвали широкие дискуссии не только среди биологов и медиков, но и среди правоведов, социологов, теологов, философов. Подчеркивают, что получение ЭСК от эмбриона человека не может быть этически оправданным, т.к. при этом разрушается эмбрион. А разрушение человеческой жизни во имя прогресса медицины должно быть запрещено. В Конвенции о правах человека и биомедицине (1996, Совет Европы) в статье 18 п.2 говорится: “Запрещается создание эмбрионов человека в исследовательских целях” [18]. Томсон с коллегами [45] использовал эмбрионы, сформированные при экстракорпоральном оплодотворении (ЭКО) для терапевтических целей, незатребованные для донора (доноров гамет) и переданные с их согласия исследователям. Они предназначались для разрушения. Герхарт с коллегами [41] использовал клетки эмбрионов и плодов после медицинских абортов (с согласия доноров). Т.е. источники получения ЭСК в этих работах – разные. Обсуждают следующие проблемы. Что является морально более оправданным? Разрешать, чтобы невостребованные эмбрионы были разрушены или были использованы для исследований и/или для лечения, что может принести пользу больным людям? Известна максима: абсолютно незащищенный нуждается в абсолютной защите.
Согласно Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации (1964; Токио,1975) и Конвенции о правах человека и биомедицины (Страсбург,1996; Овьедо,1997) [18], – “Интересы и благо отдельного человека должны превалировать над интересами общества и науки”(статья 2). Статья 18. “Исследования на эмбрионах, проводимые in vitro”: 1. В случаях, когда закон разрешает проведение исследований на эмбрионах in vitro, законом же должна быть предусмотрена адекватная защита эмбрионов. 2. Запрещается создание эмбрионов человека в исследовательских целях [18]. Появляются доказательства, что не обязательно для лечения заболевания получать ЭСК, разрушая эмбрион человека [19, 20, 22, 24, 29, 35, 37, 38, 40, 43]. Выделение стволовых клеток рожденного организма (без нанесения вреда последнему) может быть выполнено для решения ряда теоретических и практических задач в технологии ЭСК: для лечения онкозаболеваний, нарушений иммунной системы, заболеваний крови, мышц, кожи и др. Например, в настоящее время расширяются исследования, опубликованы сообщения о клиническом использовании и создании банков стволовых клеток гемопоэза, выделенных из пуповины, что является этически приемлемым и перспективным. Разрабатываются иные альтернативные пути получения стволовых клеток человека [19, 20, 22, 24, 29, 40]. В одном из разделов Доклада Национального института здоровья (НИЗ) США поддерживается идея о том, что ЭСК человека можно получать при партеногенетическом создании большого количества бластоцист от активированных, но не оплодотворенных ооцитов человека (т.е. не эмбрионов) или иными методами биотехнологии [38]. Ряд стран (Италия, Германия) ввели запрет на проведение исследований с эмбрионами человека. Франция рекомендует относиться с уважением к эмбриону от момента его зачатия; легальные права имеет плод при рождении, т.е. – запрет de facto. В Великобритании, Канаде и Австралии не запрещено создание эмбрионов для исследовательских целей, но разработана система регулирования и контроля последних при функционировании соответствующих законодательных актов. В США соответствующие исследования проводятся в частном секторе, так как Конгресс запрещает использовать федеральные средства на подобные исследования. Перспективы для терапии с использованием ЭСК человека рассматривают как новую эру в трансплантации и клеточной терапии и это обязывает страны провести ревизию исследований на эмбрионах человека. Изложенная ситуация побудила Государственный совет Франции и НИЗ США обсуждать этот вопрос. Обе страны пришли к одинаковому заключению о том, что такие исследования должны быть ограничены лишь эмбрионами, неиспользованными при ЭКО, которые все равно должны были бы быть разрушены (только с согласия их “владельцев”). Это является широкой и прагматической позицией. Какую бы крайнюю или умеренную позицию не занимали участники обсуждения вопроса о судьбе неиспользованных эмбрионов, о разрушении эмбрионов человека (как незатребованных для терапии бесплодия) или использовании их, в том числе для решения проблем ЭСК человека, имеется определенная разница между созданием эмбриона специально для исследований и выполнением исследований на эмбрионе, предназначенном для разрушения в любом случае. Более того, который из следующих вопросов этически корректнее: разрешать неиспользованным эмбрионам быть разрушенными или использовать их для исследований, полезных для больных людей? НИЗ США в новом руководстве делает попытки дать различия между производными клеток от эмбрионов, исследования на которых правительство США запретило поддерживать и исследованиями на клетках, однажды выделенных и которые (исследования) будут финансироваться. По предлагаемым правилам, СК могут быть получены только от невостребованных криоконсервированных эмбрионов человека после завершения программы ЭКО-ПЭ для данной пары. “Это будет путь гарантии разделения ситуаций между созданием эмбриона и решением передать эмбрион для исследований”, – сказала Лэйна Скирболл, директор научной полиции НИЗ США. Врачи, участвующие в выполнении программ ЭКО, не смогут быть избранными в фонд НИЗ США по исследованию на ЭСК. Таким образом, в США, Франции, Канаде, Австралии обсуждают законодательство, согласно которому будут разрешены исследования на эмбрионах человека, только невостребованных после ЭКО; исследования ЭСК на таких эмбрионах, получение СК только от криоконсервированных и невостребованных (т.е. переданных осознанно их “владельцами”) эмбрионов человека, при соблюдении соответствующего регулирования. Руководства и принципы по выполнению исследований на ex utero предимплантационных эмбрионах человека, как и проблема определения статуса эмбриона человека [16, 25–28, 36, 38] детально обсуждаются Европейской группой по этике в науке и в новых технологиях Европейской комиссии [37]; рабочими группами Руководящего комитета по биоэтике в Совете Европы, создающими дополнительные протоколы к Конвенции о правах человека и биомедицине [28, 36, 39]. Перспективы использования ЭСК человека рассматривают как новую эру в трансплантации и клеточной терапии и это обязывает страны провести ревизию исследований на эмбрионах человека. Рекомендуют разрешение исследований СК при строгих условиях. Исследования могут быть разрешены только на неиспользованных эмбрионах. Имплантация экспериментальных эмбрионов для получения детей должна быть запрещена. Однако лишь при осознании специалистами и обществом необходимости ограничения определенных исследований; понимании того, что прогресс в обретении новых биомедицинских знаний не является абсолютной целью; создании действенной информативной системы оценки последствий использования новых достижений науки, не столько ретроспективной оценки, сколько профилактической ; регулирования научной деятельности со стороны общества, закона и морали возможно соблюдение норм научной рациональности, развитие функционирующей системы сохранения морали общества, охраны среды обитания [4–7, 10, 12–14, 18, 25–28, 36–39, 43]. Необходимо сузить рамки морали и соблюдать основной тезис медицины – "не навреди". Материалы подготовлены при финансовой поддержке РФФИ Проект №00-06-80013 Л.Ф.Курило НИИ клинической генетики Медико-генетического научного центра РАМН, Москва ЛИТЕРАТУРА 1. Бодемер Ч. Современная эмбриология. М: Мир1971; 446. 2. Васильев И.М., Васильева С.Г. Факторы, влияющие на выделение эмбриональных стволовых клеток свиньи. Онтогенез 1995а; 26:3:201–205. 3. Васильева С.Г., Васильев И.М. Эффект стадии развития и условий культивирования для получения эмбриональных клеток коровы и мыши. Онтогенез 1995б;26:3:206–212. 4. Конюхов Б.В. Клонирование позвоночных: успехи и проблемы. Генетика 1997;33:12; 1605–1620. 5. Курило Л.Ф. Некоторые морально-этические проблемы репродукции человека. В кн.: Биомедицинская этика. Ред. В.И.Покровский. М: Медицина 1997;151–171. 6. Курило Л.Ф. Развитие эмбриона человека и некоторые морально-этические проблемы методов вспомогательной репродукции. Пробл репрод 1998; 4:3:39–49. 7. Лопухин Ю.М. Медицина и стабильность мира. В кн.:Биомедицинская этика. Вып.2. Ред. В.И.Покровский, Ю.М.Лопухин, М: Медицина 1999;212–216. 8. Савченкова И.П. Эмбриональные стволовые клетки в биологии: настоящее и будущее. Дубровицы 1999;97. 9. Семенова-Тян-Шанская А.Г. Первичные половые клетки зародыша человека в период миграции к зачаткам гонад. Арх анат 1969;56:6:3–8. 10. Силуянова И.В. Биоэтика в России: ценности и законы. М 1997;223. 11. Фалuн Л.И. Эмбриология человека. Атлас. М: Медицина 1976; 544. 12. Юдин Б.Г. Природа этического знания. В кн.: Введение в биоэтику. М: Прогресс-Традиция 1998;21–52. 13. Юдин Б.Г. Принципы биоэтики. Там же. 53–75. 14. Юдин Б.Г. Клонирование человеека: предварительные уроки дискуссии. В кн.: Биоэтика: принципы, правила, проблемы. М 1998;460–467. 15. Balling R. Transgenic Technology as a Tool. Ch. 4 In.: Embryos, Genes and Birth Defects. Ed. P.Thorogood. Jonh Wiley & Sons Ltd.1997; 49–67. 16. Baird D.T. Report – Council of Europe's Third Symposium on Bioethics 1996;Strasbourg. 17. Camper S.A., Saunders T.L., Kendall S.K. et al. Implementing Transgenic and Embryonic Stem Cell Technology to Study Gene Expression, Cell-Cell Interactions and Gene Function. Biol Reprod 1995;52:2:246–257. 18. Convention For the Protection of Human Rights and Dignity of the Human Being with regard to the Application of Biology and Medicine. Council of Europe.Oviedo 1997. 19. Cord blood banking for potential future transplantation: subject review. Am. Acad. Pediatrics. Work Group on Cord Banking. Pediatrics. 1999;104(1Pt1):116–118. 20. Embryonic Stem Cell Technology 20. Canadian Bioethics Soc. Presentation. November 30,1999. 21. Evans M.J., Kaufman M.H. Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos. Nature 1981;292:154. 22. Fernandez M.N. Eurocord position on ethical and legal issues involved in cord blood transplantation. Bone Marrow Transplant 1998;22:Suppl:1:584–585. 23. Gilbert S.F. Developmental Biology. Fourth ed. Sinaurer Associates, Inc. Publishers. Sunderland, Massachusetts 1994. 24. Gluckman E., Rocha V., Chastang C. Cord blood banking and transplant in Europe. Eucord Vox Sang 1998;74:Suppl,2:95–101. 25. Hermeren G. Nature and status of the embryo: Philosophical aspects.12 p. Report – Council of Europe's Third Symposium on Bioethics, 1996, Strasbourg. 26. Honnefelder L. Nature and status of the embryo: Philosophical aspects.14 p. Report – Council of Europe's Third Symposium on Bioethics, 1996, Strasbourg. 27. Kurilo L.F. Nature and status of the embryo: scientific aspects. 19 p. Report. – Council of Europe's Third Symposium on Bioethics, 1996, Strasbourg. 28. Кurilo L. Embryonic stem cells. Report for Working Party on the protection of the Human Embryo and Foetus (CDBI-CO-GT3), Steering Committee on Bioethics. Council of Europe, 4.02.2000;1–13. 29. Li K., Liu J., Fok T.F. et al. Human neonatal blood: stem cell content, kinetics of CD34+ cell decline and ex vivo expansion capacity. Br J Haematol 1999;104:1:178–185. 30. Martin G. Isolation of pluripotent cell line from early mouse embryos cultured in medium conditioned by teratocarcinoma stem cell. Proc Nat Acad Sci USA 1981;78:7634. 31. МсGrath J., Solter D. Completion of mouse embryogenesis requires both the maternal and paternal genomes. Cell 1984;37:179–183. 32. Morrison A.E., Green R.H., Watson D.M., Franklin I.M. Evaluation and eligibility of HLA-identical sibling donors for stem cell/bone marrow donation. Transfus Med 1998;8:3:215–220. 33. Morrison S.J., Shah N.M., Anderson D.J. Regulatory Mechanisms in Stem Cell Biology. Cell 1997;88:3:287–298. 34. Patten B.V. Human Embryology. Re-edition. Maidenhead, McGraw Hill, 1976. 35. Pluripotent Stem Cells. Nat. Inst. of Health USА 15.01.1999; 6. 36. Preliminary draft Protocol on Protection of the Human Embryo and Foetus. CDBI-CO-GT3. 2000;3. 37. Press Dossier. Adoption of an Opinion on Human Embryo Research. The European Group on Ethics in Science and New Technologies to the European Commission. 23 November 1998;70. 38. Report of the Human Embryo Research Panel. Nat. Inst. of Health USA, Bethesda, Maryland. September,1994;83. 39. Reports written by members of the CDBI-CO-GT3 conserning the different items to be included in the Protocol on the protection of the human embryo and foetus. CDBI-CO-GT3.1997;7,57. 40. Robin C., Pflumio F., Vainchenker W., Coulombel L. Identification of lymphomyeloid primitive progenitor cells in fresh human cord blood and in the marrow of nonobese diabetic-severe combined immunodeficient (NOD-SCID) mice transplanted with human CD34(+) cord blood cells. J Exp Med 1999;189:10:1601–1610. 41. Shamblott M.J., Axelman J., Wang Sh., Bugg E.M., Littlefield J.W., Donovan P.J., Blumenthal P.D., Huggins G.R., Gearhart J.D. Derivation of pluripotent stem cells from culturedd human primordial germ cells. Proc Nat Acad Sci USA. 1998;95:13726-13731. 42. Shim H., Gutierrez-Adan A., Chen L.R., BonDurant R.H., Behboodi E., Anderson G.B. Isolation of pluripotent stem cells from cultured porcine primordial germ cells. Biol Reprod 1997;57:5:1089–1095. 43. Sugarman J., Kaalund V., Kodish E., Marshall M.F., Reisner E.G., Wilfond B.S., Wolpe P.R. Ethical issues in umbilical cord blood banking. Working Group on Ethical Issues in Umbilical Cord Blood Banking. JAMA 1997;278:11: 938–943. 44. Thomson J.A., Kalishman J., Golos T.G., Durning M., Harris C.P., Hearn J.P. Pluripotent Cell Lines Derivad from Common Marmoset (Callithrix jacchus) Blastocysts. Biol Reprod 1996;55:2:254–259. 45. Thomson J.A., Itskovitz-Eldor J., Shapiro S.S., Waknitz M.A., Swiergiel J.J., Marshall V.S., Jones J.M. Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts. Science 1998;282:5391:1145-1147. 46. Willadsen S.M. Nuclear transplantation in sheep embryos. London Nature 1986;320:63–65. |