Влияние гормонов гипофиза на функциональную активность интерстициальных эндокриноцитов семенников
|
Восполнение гормонального дефицита у больных с вторичным гипогонадизмом является серьезной проблемой. Несмотря на успехи, достигнутые при заместительной гормональной терапии, описаны случаи токсического поражения внутренних органов [10, 11]. Кроме того, имеется категория больных, у которых проведение заместительной терапии оказывается неэффективным из-за развивающейся невосприимчивости к экзогенно вводимым препаратам [4, 7]. Поэтому изучение гипофизарно- тестикулярной регуляции in vitro и разработка методов восполнения гормонального дефицита имеют большое значение.
Изучение влияния гормонов гипофиза на семенники начато на заре XX века Ph.Smith. Большой вклад внесен J.Greep и O.Fevold, обнаружившими в 1937 г. два гормона гипофиза - фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) и лютеинизирующий гормон (ЛГ). Введение ЛГ и ФСГ гипофизэктомированным крысам предотвращает атрофию семенных канальцев. Клетки Лейдига под влиянием ЛГ синтезируют тестостерон. ЛГ действует на клетки Лейдига через ЛГ-рецепторы, находящиеся на поверхности клеток Лейдига. Кроме того, на мембранах клеток Лейдига обнаружены специфические пролактин-рецепторы [6]. При некоторых формах бесплодия с проявлением андрогенной недостаточности у больных были обнаружены структурные изменения ЛГ, который не может взаимодействовать с ЛГ-рецепторами клеток Лейдига. Это приводит к снижению уровня тестостерона и развитию андрогенной недостаточности [13]. Известно, что клетки Лейдига участвуют в синтезе не только тестостерона, но и некоторых биологически активных веществ, например пропиомеланокортина и мелатонина, которые включаются в паракринную и аутокринную регуляцию функции яичка [9]. Синтез тестикулярного пропиомеланокортина и его метаболитов находится под контролем гипофизарного ЛГ. Кроме того, специфические рецепторы для b-эндорфинов обнаружены в клетках Сертоли, и паракринная регуляция осуществляется через аденилатциклазную систему [9]. На клетках Лейдига отсутствуют ФСГ-рецепторы, но ФСГ модулирует функцию клеток Лейдига опосредованно на уровне паракринной регуляции через клетки Сертоли [8]. Исследования сочетанной культуры клеток Лейдига и клеток Сертоли показали важную роль последних в стимулирующем действии ФСГ на клетки Лейдига[2]. Исследования монокультуры клеток показали наличие морфологических изменений гладкой эндоплазматической сети и митохондрий, что приводило к быстрому старению культуры клеток и их гибели через 8-9 сут, в то время как в сочетанной культуре клетки Лейдига были жизнеспособны до 14 сут. Функциональная активность клеток Лейдига главным образом определяется секрецией гонадотропинов и некоторыми лекарственными препаратами, например хориогоническим гонадотропином. Стимулирующее или ингибирующее действие, оказываемое на клетки Лейдига в зависимости от дозы ЛГ, ФСГ и ХГ, было установлено многими исследователями [2, 3, 5, 12]. Однако, представляет интерес состояние клеток Лейдига после воздействия на них гонадотропинов в различные сроки культивирования. Материал и методы Исследования проведены на неонатальных крысах. Всего выполнено 160 экспериментов. Выделение и культивирование клеток Лейдига осуществлялось по методу [1]. Аденогипофиз промывался в растворе Хенкса. Затем готовилась суспензия из клеток аденогипофиза в камере Максимова с применением глазных ножниц. По предложению проф. И.Д. Кирпатовского стимуляцию культивируемых клеток Лейдига осуществляли путем добавления к ним аденогипофизарной культуры в различные сроки культивирования с последующей оценкой морфофункционального состояния клеток Лейдига. Результаты и обсуждение При исследовании культивируемых неонатальных клеток Лейдига отмечено, что эксплантаты прикрепляются к субстрату уже через 1,5-2 ч с момента культивирования. Через 36-48 ч в культуре клеток Лейдига определялась зона прикрепившегося эксплантата, зона роста и начала формироваться зона выселения клеток. В 3-суточной культуре зоны роста и выселения клеток увеличиваются. Клетки Лейдига имели различную форму - от овальной до звездчатой с большим содержанием липидов в цитоплазме, выявляемых при окраске суданом черным B. Ядра клеток округлой либо овальной формы. Отмечены единичные фибробласты. При анализе 5-6-суточной культуры выявлена следующая гистологическая картина. Вокруг прикрепившегося эксплантата формируется обширная зона роста. Общее количество клеток Лейдига значительно увеличивается. Зона роста хорошо выражена. Клетки Лейдига в ней имеют различную форму, но чаще встречаются Клетки полигональной звездчатой формы. Ядра клеток овально-вытянутые либо округлые. В цитоплазме содержится значительное количество липидов. Встречаются единичные фибробласты веретенообразной формы. В 7-суточной культуре клетки Лейдига, как правило, образовывали сплошной монослой, представленный в виде зоны роста. В этой области клетки Лейдига в основном полигональной звездчатой формы. Ядра их округлой либо овально-вытянутой формы. К 14-м суткам в культуре происходят значительные изменения. В зоне роста, которая за период культивирования значительно увеличилась, отмечается вакуолизация эндокриноцитов. Межклеточные связи разрушены, и клетки находятся на субстрате чаще изолировано друг от друга. Анализ функциональной активности клеток Лейдига показал, что наиболее стабильный, относительно высокий и продолжительный уровень тестостерона (3,8+0,3 нг/мл) отмечается при стимуляции клеток Лейдига с первых суток культивирования. Для улучшения морфофункционального состояния культивируемых клеток Лейдига стимуляцию клетками аденогипофиза и хорионическим гонадотропином наиболее целесообразно проводить с первых суток культивирования. Полученные данные позволяют разрабатывать новые направления для лечения больных с вторичным гипогонадизмом, когда при выраженной андрогенной недостаточности требуется пересадка мужской половой железы и гипофиза одновременно. Е.С. Дендеберов Научно-клинический центр андрологии и пересадки эндокринных органов; кафедра оперативной хирургии и хирургической анатомии Российского университета Дружбы народов, Москва ЛИТЕРАТУРА 1. А.С. 1317305 СССР. Способ получения культуры эмбриональных клеток Лейдига /Басмаджян М.Е., Кирпатовский И.Д., Геворкян В.И., Гамбаров С.С. 1987. 2. Дендеберов Е.С. Культивирование неонатальных интерстициальных эндокриноцитов семенников крыс //Проблемы саногенного и патогенного эффектов экологических воздействий на внутреннюю среду организма: Материалы международного симпозиума - Чолпон-Ата 1993; 70. 3. Кирпатовский И.Д., Дендеберов Е.С. Аллотрансплантация Культуральных неонатальных андрогенпродуцирующих клеток Лейдига //Вестник Российской Академии медицинских наук 1994; 4: 42-46. 4. Кирпатовский И.Д., Д.Л.Горбатюк. Хирургическая коррек-ция эндокринной импотенции. Москва 1986. 5. Потиха О.П., Турчин И.С., Тронько Н.Д. Цитологическая и гормональная характеристики клеточных культур из семенников новорожденных крысят. Физиол журн 1990; 36: 4: 80-83. 6. Bera T.K., Hwang S.I., Swanson S.M., Guzman R.C., Edery M., Nandi S. In situ localization of prolactin receptor message in the mammary glands of pituitary-isografted mice. Mol-Cell-Biochem. - 1994; 132(2): 145-149. 7. Kitahara S., Yoshida K., Ishizaka K., Higashi Y., Takagi K., Oshima H. Secondary treatment failure without anti-human chorionic gonadotropin antibody in a patient with Kallmann syndrome. Int J Urol 1998; 5: 4: 398-400. 8. Kliesch S; Behre H.M; Nieschlag E. Recombinant human folliclestimulating hormone and human chorionic gonadotropin for induction of spermatogenesis in a hypogonadotropic male. Fertil Steril 1996; 66: 164. 9. Luboshitzky R., Wagner O., Lavi S., Herer P. Lavie P. Abnormal melatonin secretion in hypogonadal men: the effect of testosterone treatment. Clin Endocrinol (Oxf) 1998; 48(5): 669-670. 10. Parker S., Armitage M. Experience with transdermal testosterone replacement therapy for hypogonadal men. Clin Endocrinol Oxf 1999; 50: 1: 5-62. 11. Soe K.L., Soe M., Gluud C.N. Liver pathology associated with anabolic androgenic steroids. Ugeskr Laeger 1994; 156: 17: 2585-8. 12. Tang K., Bartke A., Gardiner C.S., Wagner T.E, Yun J.S. Gonadotropin secretion, synthesis, and gene expression in two types of bovine growth hormone transgenic mice. Biol Reprod 1993; 49(4) 865. 13. Winters S.J. Current status of testosterone replacement therapy in men. Arch Fam Med. 1999; 8(3: 257-263. |