Молекулярно-биологические аспекты имплантации у человека и животных.
|
Словарь терминов:
Апоптоз - программированная клеточная гибель, контролируемая генетически и характеризующаяся митохондриальной дисфункцией, активацией протеолити ческих ферментов (каспаз), специфической фрагментацией ДНК, блеббингом плазматической мембраны и распадом клетки на апоптотические тельца. Адгезия - процесс прикрепления клеток к матриксу/субстрату или друг к другу, опосредуемый активностью белков цитоскелета, специфических белков адгезии (интегрины, кадгерины, селектины, трансмембранные протеогликаны, белки семейства иммуноглобулинов), их рецепторов, обеспечивающий адекватную локализацию клетки и активацию внутриклеточ ных сигнальных биохимических путей, сопровождаю щих клеточную активацию. Факторы роста - ИФР-1, ИФР-2, ТФР, ФРФ, СЭФР, ЭФР, ФРТ, ФРП, ФРК, КСФ (см. список сокращений) - полипептидные гормоны, синтезируемые рядом клеток, паракринным, эндокринным и аутокринным путем регулирующие функционирование клеток в популяции, взаимодействующие со специфически ми рецепторами клеточных мембран, обладающие митогенной, пролиферативной, апоптоз-модулирующей и метаболической активностью. Цитокины - полипептидные гормоны, продуцируе мые клетками при их активации, регулирующие межклеточные взаимодействия и обладающие рядом специфических биологических эффектов (например, интерлейкины (ИЛ), монокины, интерферон, фактор некроза опухолей, ЛИФ - лейкоз-ингибирующий фактор). Bcl - семейство белков, проявляющих про- и антиапоптотические свойства. HSP - белки теплового шока (heat shock proteins) - семейство белков, обеспечивающих поддержание конформации клеточных белков, их ренатурацию, приобретение третичной структуры и выполнение некоторых специфических функций. Список сокращений ВРТ — вспомогательные репродуктивные технологии ИФРСБ-1,2 — белки, связывающие инсулиноподоб ные факторы роста ТФР-a и -b — трансформирующие факторы роста -a и -b ЭФР — эпидермальный фактор роста ИФР-1 и -2 — инсулиноподобные факторы роста -1 и -2 оФРФ — основная форма фактора роста фибробластов СЭФР — сосудисто-эндотелиальный фактор роста ЛГ — лютеинизирующий гормон ЛИФ — фактор, ингибирующий лейкоз ИЛ-1 — интерлейкин-1 ФРТ — фактор роста тромбоцитов ГТФ — гуанозинтрифосфат ФРК — фактор роста кератиноцитов ФРП — фактор роста плаценты КСФ — колониестимулирующий фактор Имплантация эмбриона в полости матки - сложный, многоступенчатый процесс, регуляция которого осуществляется при помощи большого количества гуморальных факторов и разнообраз ных межмолекулярных и межклеточных взаимодействий. Повышение результативности существующих методов лечения бесплодия, в том числе методов ВРТ, и разработка новых методов невозможны без изучения механизмов регуляции имплантации - одного из наиболее хрупких звеньев в становлении симбиотических взаимоотношений эмбриона и материнского организма. Известно, что оплодотворенная яйцеклетка попадает в полость матки на стадии морулы на 4-й день после овуляции. На 5-й день морула развивается в бластоцисту [44]. Материнский эндометрий восприимчив к имплантирующейся бластоцисте только в пределах строго ограниченно го во времени "окна имплантации " [5]. Наиболее вероятно, что у человека начало "окна имплантации " приходится на 7-й день после оплодотво рения/овуляции [44]. Появление в эндометрии трансмембранного гликопротеина Muc 1 ограничивает временные рамки "окна имплантации " [12]. Во время фаз аппозиции и прикрепления на наружной мембране бластоцисты образуются многочисленные микровыпячивания, в результате чего она входит в тесный контакт с маточным эпителием, что знаменует собой переход в стадию адгезии (внедрения). Электроотрицатель ный заряд на поверхности эпителиальных клеток способствует сближению бластоцисты с поверхностью эндометрия [57]. Последующая стадия инвазии трофобласта завершает процесс имплантации и характеризуется глубоким проникновением бластоцисты в эпителий матки. Синцитиотрофобласт эмбриона вторгается между эпителиальными клетками и прорастает в сторону базального слоя. Над погрузившейся в толщу эндометрия бластоцистой происходит полное смыкание покровного эпителия [5, 44]. Успех имплантации во многом зависит от синхронности обмена сигнальными молекулами между матерью и эмбрионом в ходе "диалога" , который характеризуется интенсивными молекулярными взаимодействиями между клетками и тканями и экспрессией эффекторных молекул, факторов роста и цитокинов, осуществляющих паракринную, аутокринную и интракринную регуляцию столь сложного процесса [2, 69-71]. Межмолекулярные взаимодействия модулируют как дальнейшее развитие и "поведение " бластоцисты, так и распознавание беременно сти и адаптацию к ней организма матери. Перед имплантацией ткани, составляющие секреторный эндометрий, в частности железистый эпителий, покровный эпителий, стромальные клетки, стромальные сосуды, внеклеточный матрикс, претерпевают различные морфологиче ские, клеточные и молекулярные изменения, некоторые из них очень непродолжительные [31, 44]. В период имплантации митотическая активность клеток железистого эпителия увеличивает ся, что коррелирует с возрастающей концентра цией эстрадиола [64]. Секреторная активность желез достигает максимума. К характерным морфологическим изменениям желез эндометрия, наблюдающимся только в секреторную фазу, относятся образование гигантских митохондрий, отложение гликогена, формирование систем ядерных каналов [44]. Покровный эпителий матки первым контактирует с бластоцистой, в результате чего в нем происходят анатомические и молекулярные изменения, обеспечивающие восприимчивость эндометрия к нидации эмбриона. В период имплантации в нем образуются микровыпячивания (пиноподии) на апикальной поверхности эпителия, направленные к слизистой оболочки матки. Они появляются в середине секреторной фазы менструального цикла и сохраняются в течение 48—72 ч. Этот процесс стимулируется прогестероном и ингибируется эстрогенами [63]. Появление пиноподий соответствует по времени началу "окна имплантации ", которое появляется в период максимальной рецепторной активности эндометрия [44]. Основными регуляторами морфологических изменений функционального слоя эндометрия в течение менструального цикла и в периимплан тационном периоде считаются синтезируемые в яичниках стероиды [63, 66]. Только подготовлен ный циклическим стероидным воздействием эндометрий готов к приему бластоцисты и восприятию ее гуморальных сигналов [33]. Практически для всех видов млекопитающих в репродуктивном цикле характерны две следующие закономерности: 1) возрастающая секреция эстрогенов в фазу селекции и развития фолликулов, которая в хронологическом плане лишь косвенно влияет на имплантацию ; 2) выработка значительных количеств прогестинов в секреторную фазу цикла, что совпадает по времени с имплантацией. Выраженная эстрогеновая секреция в эту фазу характерна далеко не для всех видов млекопитающих [25]. Считается, что в отличие от прогестерона эстрогены влияют на имплантацию опосредован но [37, 54]. Эстрадиол выступает в качестве пермиссив ного агента, тогда как прямое действие оказывают локальные, регулируемые им факторы — цитокины, молекулы адгезии, факторы роста [41, 71, 75]. Установлено, что для полноценной пролиферации эндометрия в течение фолликулярной фазы нормального менструального цикла необходима концентрация эстрадиола в маточном кровотоке в пределах 200 — 400 пг/мл при одновременном содержании прогестерона не более 4 нг/мл [63]. Нормальная имплантация возможна при концентрации эстрадиола 50—100 пг/мл в сыворотке крови. Таким образом, уровень эстрадиола в периферической крови не всегда может являться прогностическим фактором в отношении успеха имплантации [66]. Более того, решающую роль в имплантации играет не столько абсолютное содержание стероидных гормонов, действующих на ткани-мишени органов репродуктивной системы, и морфологическая структура эндометрия, сколько его рецептивность, т.е. количество функционально полноценных рецепторов ткани эндометрия к соответствующим стероидным гормонам [4, 7]. Эстрогены одновременно с пролиферацией клеток эпителия стимулируют развитие секреторного аппарата клетки и синтез рецепторов к эстрогенам и прогестерону, посредством взаимодей ствия с которыми и осуществляется многогран ное действие гормонов на клетки [4, 7]. Семейство стероидных рецепторов представляет собой класс белков, функционирующих на ядерном уровне и являющихся, по существу, белками, регулирующими транскрипцию. В отсутствие лигандов стероидные рецепторы находятся в комплексе с белками теплового шока hsp90 [84]. Активация рецепторов при связывании с гормоном приводит к диссоциации комплекса рецептор—белок теплового шока и димеризации рецептора. Димер обладает способностью связываться с соответствующими, строго специфичными для стероидов последовательностями ядерной ДНК, что обеспечивает селективность в отношении каждого из них и влияние на транскрипцию генов - мишеней [83]. Эстрогеновые, прогестероновые и глюкокортикостероидные рецепторы могут конкурировать за одни и те же общие транскрипционные факторы [16, 34, 82]. Большая часть гормон-рецепторных комплексов в ядре диссоциирует и инактивируется. В цитоплазму возвращаются свободный стероид и инактивированный под действием ядерных фосфатаз рецептор. Гормон, как правило, каким-либо изменениям не подвергается [7, 16]. Общепринятым является представление о том, что главным физиологическим регулятором экспрессии ядерных рецепторов внутри клеток-мишеней является уровень циркулирующих свободных гормонов [4]. Эстрадиол усиливает синтез собственных рецепторов, рецепторов прогестерона и рецепторов андрогенов. Прогестерон не только не усиливает синтез собственных рецепторов, но, напротив, подавляет его так же, как и синтез рецепторов эстрадиола. Следовательно, количество определенного вида рецепторов зависит как от содержания соответствующего активного гормона в крови, так и от концентрации стероидов других классов [7, 18]. В настоящее время обнаружены a- и b-типы эстрогеновых рецепторов. Первичная структура этих белков очень похожа, что позволяет предположить для них наличие общего механизма действия [7, 20]. Наивысший уровень экспрессии b-рецептора обнаруживается в эпителиальных клетках эндометрия в преовуляторном периоде, а также в клетках стромы и эндотелиоцитах в позднюю секреторную фазу. Экспрессия a-рецепторов максимальна в течение периовуляторного периода. Показано, что экспрессия b-рецепторов выражена значительно в меньшей степени, за исключением поздней секреторной фазы менструально го цикла. Указывается на связь b-рецепторов эстрогенов с активным ангиогенезом в этот период [52]. Рецептор прогестерона состоит из двух субъединиц — A и B в соотношении 1 : 1. Предполагается, что влияние прогестерона на эндометрий в секреторную фазу цикла и в ранние сроки беременности осуществляется, главным образом, посредством его воздействия на подтип А рецепторов, расположенных в клетках стромы эндометрия. Установлено, что уровень А- и В-изоформ по-разному регулируется в эндометрии в течение репродуктивного цикла. Прогестерон значительно увеличивает содержание А-изоформы, основной в децидуальных стромальных клетках. Эта же изоформа является более сильным активатором гена транспортного белка-1 (ИФРСБ-1) инсулиноподобных факторов роста-1 и -2 (ИФР-1 и -2) в эндометриальных стромальных клетках, чем В-изоформа рецептора прогестерона [7, 27]. Прогестерон обладает высоким сродством к своему рецептору, однако комплекс, который при этом образуется, диссоциирует и инактивируется достаточно быстро. Все метаболиты прогестерона имеют меньшее сродство к рецептору, чем он сам [53]. Отмечено незначительное сродство эстрадиола, кортизола и тестостерона к рецепторам прогестерона. В течение нормального менструального цикла содержание в эндометрии рецепторов к эстрогенам и прогестерону претерпевает закономер ные колебания, синхронные с изменением концентрации эстрадиола и прогестерона в общем и маточном кровотоке [7, 60]. Данные литературы относительно динамики рецепторов стероидных гормонов в эндометрии в течение менструального цикла противоречивы. Однако большинство исследователей сходятся в том, что концентрация рецепторов к эстрогенам и прогестерону постепенно нарастает к периовулятор ному периоду. Максимальное содержание рецепторов к прогестерону сохраняется до середины лютеиновой фазы. Общим результатом действия прогестерона во вторую фазу цикла является прогрессирующая дифференцировка клеток и завершение подготовки к приему бластоцисты. В преимплантационный период концентрация рецепторов к эстрогенам в эндометрии повышается [1, 6, 7]. Однако эстрогены в эту фазу могут оказывать лишь модулирующее влияние на генную экспрессию, обусловленную прогестероном [10, 79]. В норме наиболее высокая концентрация рецепторов, обладающих сродством к стероидным гормонам, отмечается в эндометрии в области дна матки и трубных углов [7]. Готовность эндометрия к имплантации бластоцисты определяется не только его рецепторной активностью, но и характерными морфологиче скими изменениями, во многом определяемыми процессом апоптоза клеток эндометрия [56]. Установлено, что апоптоз развивается в специфических популяциях клеток эндометрия в течение всего менструального цикла. В раннем пролиферативном эндометрии апоптозу подвергаются клетки функционального слоя. В позднюю пролиферативную фазу и вплоть до середины секреторной фазы признаков апоптоза в эндометрии не наблюдается [47]. В начале поздней секреторной фазы апоптоз вновь проявляется в стромальных клетках эндометрия. Началу апоптоза в железах и строме предшествует снижение концентрации 17b-эстрадиола и прогестерона в сыворотке крови, при этом увеличение апоптотического индекса в строме задерживается на 2 дня по сравнению с железами эндометрия. Снижение количества рецепторов к эстрогену и прогестерону в маточном эпителии обратно коррелирует с ростом апоптотического индекса в этих тканях. Интенсивность процессов апоптоза увеличивается через 3—5 дней после пика прогестерона в середине лютеиновой фазы, затем происходит постепенное распространение процесса на все клеточные компоненты функционального слоя с достижением максимального уровня за 2 дня до начала менструации [47]. Одним из возможных механизмов ускорения апоптотических изменений в эндометрии является ишемия, возникающая вследствие спазма спиральных артерий перед началом кровотече ния. Максимальный уровень процессов апоптоза сохраняется до 2-го дня менструального кровотечения [21, 78]. Клетки базального слоя не подвергаются апоптозу ни в одну из стадий менструального цикла [47]. Показано , что можно экспериментально моделировать запуск процессов апоптоза в эндометрии животных путем удаления стероидных гормонов [62]. Установлено, что активация апоптоза в эндометрии коррелирует с изменениями в концентрации 17b-эстрадиола и прогестерона в сыворотке крови во время менструального цикла, концентрацией клеточных рецепторов к эстрогенам и прогестерону, а также с выраженно стью пролиферативных и секреторных изменений эпителиальных и стромальных клеток эндометрия [21]. Показано участие апоптотических изменений эндометрия в ходе нормального процесса имплан тации мышиных эмбрионов [40]. В течение имплантации эмбриона наблюдали развитие морфологических признаков апоптоза на участке имплантации в эндометрии. На 4-й день культивирования in vitro бластоцисты от беременной мыши было зафиксировано развитие апоптоза в клетках эпителия матки, прогрессирующего по мере роста трофобласта. Вероятно, такое биологическое явление, как апоптоз, необходимо для нормального протекания стадий адгезии бластоцисты и инвазии трофобласта в ходе физиологической имплантации. Апоптоз в эпителиальных клетках матки активировался добавлением кондиционированной среды, где культивировали эмбрионы. Этот эффект достоверно блокировался антителами к трансформирующему фактору роста (ТФР). Эти результаты подтверждают важность аутокринной регуляции имплантации, а также роль ТФР в развитии апоптоза эпителиальных клеток в участке сопряжения эндометрия и трофобласта [40]. Будет ли клетка жить или погибнет при воздействии апоптозного стимула зависит от соотношения экспрессии генов bcl-2, ингибитора апоптоза, и Bax, ускоряющего апоптотическую гибель клеток [9]. В связи с этим при изучении апоптотических изменений эндометрия в ходе менструального цикла и при имплантации остается неясным, почему далеко не все клетки функционального слоя эндометрия подвержены апоптозу, если железистые клетки эпителия функционального слоя секреторного эндометрия активно экспрессируют Вax на фоне низкого содержания bcl-2 [39]. В пролиферирующем эндометрии экспрессию гена bcl-x (продукты этого гена могут обладать как про-, так и антиапоптотическими свойствами) наблюдали преимущественно в железистых эпителиальных клетках и в базальном слое. В секреторном эндометрии bcl-х обнаруживали в железистых эпителиальных клетках функциональ ного слоя. Предполагается, что продукция генов bcl-x и bcl-2 обеспечивает выживание железистых эпителиальных клеток и клеток базального слоя в пролиферирующем эндометрии, а в функциональном слое секреторного эндометрия обеспечивает локальную резистентность к клеточной гибели, запускаемой с участием или без участия Вax [62]. Интересным является вывод о том, что экспрессия генов, контролирующих апоптоз, регулируется стероидными гормонами [9]. Обнаружены циклические изменения экспрессии bcl-2 в железистых клетках, что коррелировало с изменением концентрации рецепторов эстрогенов и прогестерона в эндометрии. Вместе с тем уровень bcl-2 не менялся в яичниках в процессе индуцированного гонадотропинами роста фолликулов [49, 50]. Считается, что контроль процессов апоптоза может осуществляться стероидами как непосредственно, так и опосредованно, путем регуляции экспрессии в эндометрии местно вырабатывае мых медиаторов — факторов роста и цитокинов [9, 35, 50]. При подготовке материнского организма к имплантации в качестве локальных медиаторов действия стероидов, вовлеченных в циклические изменения эндометрия, выступают ростовые факторы [5, 11, 44]. В периимплантационном периоде они присутствуют в эндометриальной ткани в значительных количествах. Считается, что динамическая выработка ИФР-1 и -2, основной формы фактора роста фибробластов (оФРФ), эпидермального фактора роста (ЭФР), сосудисто-эндотелиального фактора роста (СЭФР), факторов роста семейства ТФР, их митотическая активность и свойства дифференциации формируют восприимчивость эндометрия к имплантирующейся бластоцисте во время "окна имплантации " [5]. Действием факторов роста опосредуются специфические изменения количественного и качественного состава субпопуляций лейкоцитов, обусловливающих адекватную материнскую иммуносупрессию и эндометриальный ответ на внедрение трофобласта [44]. Источником большинства ростовых факторов и цитокинов являются эпителиальные клетки, макрофаги, лимфоциты [38, 41, 81]. Показано, что выработка цитокинов естественными киллерами находится под воздействием прогестерона [37, 54], осуществляющего таким образом контроль иммунологических аспектов имплантации [38]. Факторы роста и цитокины представлены несколькими семействами пептидов и белков, которые вовлечены в паракринную, интракрин ную и аутокринную регуляцию клеточных реакций за счет связывания со специфическими рецепторами клеточной поверхности [2]. В разные фазы менструального цикла экспрессируются разные семейства факторов роста, для которых продемонстрирована выраженная циклическая зависимость, свидетельствующая о том, что они опосредуют влияние эстрогенов и прогестерона в эндометрии [5, 11]. Рецепторы факторов роста расположены на поверхности наружной мембраны клеток. Они представлены классом белков с тирозинкиназ ной активностью, состоят из одной полипептид ной цепочки, богатой цистеиновыми остатками в экстрацеллюлярной части рецептора, и имеют один тирозинкиназный домен в интрацеллюляр ной части [80]. Связывание фактора роста с рецептором обеспечивает его димеризацию и активацию тирозинкиназы. Так инициируется каскад фосфорилиро вания. Субстратами фосфорилирования являются разнообразные киназы, фосфолипазы и сами рецепторы факторов роста [34]. В качестве биологических эффектов фосфорилирования отмечено изменение митогенных характеристик тканей и дифференцировки клеток [5], стимуляция транспортных систем и хемотаксис [8], активация метаболических путей [67]. Образование комплексов факторов роста с рецепторами приводит к значительным изменениям синтеза последних. В отличие от рецепторов стероидных гормонов уровень мРНК рецепторов факторов роста транзиторно и многократ но увеличивается в течение нескольких часов после воздействия [34]. Основную роль в пролиферации клеточных компонентов железистого эпителия эндометрия, стромы, гладкой мускулатуры и эндотелия сосудов играют специфически экспрессированные во время пролиферативной фазы цикла ЭФР, ИФР-1 и -2, ФРФ и СЭФР. Считается, что ИФР-1 и -2 стимулируют митоз и дифференциацию клеток эндометрия в течение менструального цикла и на ранней стадии беременности, митогенны для клеток стромы и железистого эпителия [5]. ИФР-1 индуцирует многие дискретные локальные ответы в клетках эндометрия, включая повышение локальной проницаемости сосудов, децидуализацию, экспрессию некоторых генов [61]. При изучении содержания ИФР-1 и ИФР-2 в эпителии матки и экстрацеллюлярном матриксе во время имплантации в стадии инвазии трофобласта было установлено, что эти ростовые факторы обнаруживали различные по локализации и временным характеристикам профили экспрессии. Так, ИФР-1 экспрессировался в строме и железистом эпителии, являющимися участками начального прикрепления и инвазии трофобласта. ИФР-2 в значительно меньшей степени обнаруживался в базальном слое на латеральных плазматических мембранах, но определялся в более высокой, чем у ИФР-1, концентрации в апикальной части клеток, что позволяет предположить его участие в стадии адгезии бластоцисты [68]. Животные, нокаутные по гену ИФР-1, проявляли сниженную фертильность [72]. По данным других авторов [24], очень низкий уровень ИФР-1 обнаруживался в клетках трофобласта, выстилающих лакуны, первичных и вторичных ворсинах. Умеренное или большое количество ИФР-2 регистрировалось в ламеллярных клетках синцитиотрофобласта, первичных и вторичных ворсинах, а также в мигрирующих клетках и во внутрисосудистых клетках трофобласта. При изучении семейства связывающих белков ИФРСБ установлено, что в 1-й день менструального цикла в клетках эндометрия начинался синтез ИФРСБ-1 и ИФРСБ-2. На 7—10-е сутки обнаруживали появление этих белков в децидуальных клетках в участке имплантации [22, 51]. Экспрессия ИФРСБ-1 находится под контролем прогестерона [11]. Показано, что ИФРСБ-1 может действовать в качестве белка, защищающего материнский организм от избыточной инвазии трофобласта [5, 17]. Интересно, что действие 17b-эстрадиола на пролиферацию эпителиальных клеток эндометрия человека опосредуется влиянием эстрадиола на секрецию ИФР-1 стромальными клетками эндометрия. Одновременно выявлены стимулирующие пролиферацию эпителиальных клеток эндометрия эффекты инсулина, которые реализовывались через активацию стромальных клеток [51]. Клетки стромы эндометрия у человека и грызунов подвергаются децидуальной трансформа ции непосредственно перед имплантацией под влиянием метаболического сигнала со стороны бластоцисты. Реакции присоединения бластоцисты к эндометрию предшествует экспрессия ЭФР. Децидуальная трансформация развивается вначале в непосредственной близости к бластоцисте, затем метаболический сигнал эпителия передается строме с развитием соответствующей стромальной децидуальной реакции [4]. Децидуализация включает в себя многочисленные изменения в стромальных клетках. Вначале увеличивается пролиферация мезенхималь ных клеток, которые претерпевают постмитоти ческую дифференцировку, формируя первичную децидуальную зону. Затем пролиферируют и дифференцируются дальше расположенные мезенхимальные клетки, в результате чего образуется вторичная децидуальная зона. Ее клетки подвергаются дальнейшей дифференцировке, полиплоидизации и апоптозу, "освобождая" место для имплантирующегося эмбриона. Среди разнообраз ных факторов роста, экспрессирующихся в децидуальных клетках в этом периоде, — ИФР-1, рецепторы к ЭФР, ТФР-a и гепаринсвязывающему ЭФР [51]. Интересно, что дополнительное введение гепаринсвязывающего ЭФР в среду инкубации in vitro индуцировало локальную реакцию клеток эндометрия, вызывало повышение проницаемости сосудов, усиливало процесс децидуализации [61]. Стимуляции пролиферации клеток стромы in vitro в бессывороточной среде добивались добавле нием в среду инкубации гормонов и целого комплекса факторов роста (оФРФ, ЭФР, ТФР-a, ИФР-1). Примечательно , что ни один из перечисленных ростовых факторов был не способен достоверно стимулировать пролиферацию этих клеток в отсутствие прогестерона. Более того, прогестерон, единственный из ряда гормонов, применявшихся в работе, мог стимулировать митоз в присутствии факторов роста. Таким образом, приведенные факты свидетельствуют о существовании зависимости от прогестерона митотической активности и дифференциации клеток эндометрия, опосредуемой путем взаимодействия с факторами роста [65]. Эти эксперименты свидетельствуют также о важности межклеточных взаимодействий между клетками стромы и эпителия эндометрия, реализуемых растворимыми сигнальными молекулами [63]. В настоящее время роль химического посредника в передаче сигнала бластоцисты от эпителия эндометрия к строме с последующим развитием ее децидуальной реакции отводится гистамину и/или простагландинам [4]. Увеличение продукции простагландина Е2 модулирует секрецию активатора плазминогена урокиназного типа, который экспрессируется в стромальных клетках эндометрия. Аккумуляция активатора плазминогена и последующая сосудистая реакция находятся под контролем ЭФР. Этот эффект может блокироваться ингибитора ми транскрипции или трансляции. Инкубация клеток с простагландином Е2 вызывает повышение активности активаторов плазминогена в среде культивирования [15]. Эффекторные молекулы семейства ЭФР - фактор, ингибирующий лейкоз (ЛИФ), интерлейкин - 1 (ИЛ-1) и ТФР-a и -b, обнаружены у грызунов на ранних стадиях имплантации. Показано, что ген ЭФР экспрессирован в просвете матки мыши, окружающем бластоцисту непосредственно перед имплантацией. ЭФР способствует росту бластоцисты и разрастанию трофобластов in vitro [5, 43, 45]. Похожий эффект был зарегистрирован в стромальных клетках эндометрия человека [15]. Роль ЭФР в репродуктивной функции стала активно изучаться лишь в последние несколько лет. Обнаружена высокая активность ЭФР в клетках железистого эпителия матки, тогда как в строме или миометрии его уровень был значительно ниже. У свиней на 2-4-й день беременности ЭФР локализовался в основном в эпителии матки. К 5-му дню его экспрессия в эпителии снижалась, но на 6—7-й день обнаруживалась в децидуальных клетках. Кроме того, этот фактор определялся в трофоэктодерме и во внутренней клеточной массе преимплантационного эмбриона на 4-5-й день или в эмбриональной энтодерме и мезодерме на 5-6-й день беременности. Предполагается, что ЭФР играет важную роль в росте, миграции и адгезии клеток эндометрия, а также в формировании экстрацеллюлярного матрикса в течение цикла и на ранних стадиях развития эмбриона [74]. Тирозинфосфорилированные рецепторы ЭФР обнаружены в плаценте, что предполагает участие семейства ЭФР в поддержании беременно сти [43]. ЭФР в программах ЭКО и ПЭ стимулировал ядерное и цитоплазматическое созревание ооцитов. Показано стимулирующее влияние используемых в процедуре ЭКО гонадотропинов на созревание ооцитов под действием ЭФР [23]. В эмбрионе на ранних стадиях развития продемонстрировано присутствие всего семейства ИЛ-1, включающего несколько гомологичных пептидов и их рецепторы. В эндометрии женщин семейство ИЛ-1 присутствует в макрофагах и эндотелиальных клетках, в основном в секреторной фазе цикла. В раннем периоде беременности взаимодействие эмбрионального ИЛ-1 и рецепторов ИЛ-1 в эндометрии может обеспечивать распознавание и имплантацию эмбриона [48]. ИЛ-1 и ТФР-b играют существенную роль в имплантации за счет регуляции экспрессии стромой эндометрия тканевых ингибиторов металлопротеиназ -1 и -3, а также коллагеназы IV типа, важных для инвазии трофобласта [17]. Потеря коллагена IV типа в строме матки начинается в середине секреторной фазы и продолжается после имплантации. Предполагают, что уменьшение вязкости этого типа коллагена - главный фактор, способствующий развитию отека во внеклеточном пространстве при имплантации бластоцисты [44]. Прогестерон редуцировал стимулирующий эффект ИЛ-1a в отношении металлопротеиназы-3 в секреторной фазе in vitro и in vivo [36, 42]. Известно, что подавление активности металлопро теиназ необходимо для сохранения стабильно сти ткани в инвазивных процессах при имплантации и развитии плаценты [17]. ЭФР и ФРФ, напротив, увеличивали уровень протеолитических ферментов (металлопротеиназ матрикса), продуцируемых эндометриальными стромальными клетками в процессе децидуали зации in vitro, но не влияли на активность их ингибиторов [59]. Несмотря на уже известные факты, роль белков семейства ЭФР в процессе имплантации у людей и животных требует дальнейшего исследования. Успех наступления имплантации и дальнейшее развитие беременности невозможны без сложных процессов ангиогенеза, регуляция которого протекает под действием ряда ингибиторов и активаторов неоваскуляризации [3]. оФРФ представляет собой ангиогенный белок, являющийся митогеном для эндотелиоци тов капилляров in vitro [5], относится к числу гепаринсвязывающих и широко представлен в тканях женской репродуктивной системы. Уровень оФРФ не различается в биоптатах эндометрия, полученных в различные фазы менструального цикла, однако он значительно возрастает в постменопаузе. оФРФ контролирует выработку ферментов, в частности коллагеназы и активатора плазминогена, способствующих вазодилатации и возникновению кровотечения. Нужно отметить, что блокирование ангиогенеза при применении ингибиторов пролифера ции эндотелия приводит к процессам усиления апоптоза [3]. оФРФ выявляется в плаценте и эндометрии при беременности. Экспрессия этого фактора роста установлена в I триместре беременности в синцитиотрофобласте вокруг плацентарных ворсин, а также в клетках цитотрофобласта. Максимальная экспрессия ФРФ выявляется в гладкомышечных клетках вокруг плацентарных сосудов большого и среднего калибров. Этому фактору отводят роль ключевого регулятора ангиогенеза в матке [3]. В экспериментах на грызунах добавление относительно высоких концентраций оФРФ (100—500 нг/мл) в среду инкубации ускоряло процесс адгезии бластоцисты и увеличивало зону экспансии имплантирующегося эмбриона [75]. Другим важнейшим регулятором ангиогенеза у развивающегося эмбриона признан СЭФР. Он экспрессируется клетками железистого эпителия и стромы эндометрия в ответ на воздействие эстрадиола [5]. СЭФР и мРНК СЭФР выявлены в биоптатах эндометрия человека во все фазы менструального цикла. Стромальные и эпителиаль ные клетки эндометрия, изолированные в секреторную и пролиферативную фазы цикла, экспрессируют три из пяти известных на сегодняшний день изоформ СЭФР [3]. Экспрессия СЭФР в тканях матки и яичников регулируется лютеинизирующим гормоном, т.е. отражает циклическую природу овариально го ангиогенеза. Мощными стимуляторами экспрессии СЭФР являются гипоксия, ИЛ-1, ЭФР и ТФР-b [3]. При сравнительном изучении экспрессии СЭФР и фактора роста плаценты (ФРП) в первичных очагах имплантации выявлено, что в течение лакунарной стадии СЭФР, но не ФРП, выявляется в клетках цитотрофобласта, выстилающих эмбриональную полость. В дальнейшем клетки цитотрофобласта формируют ворсинки, где находят уже оба типа факторов роста. Сочетанная экспрессия СЭФР и ФРП обнаружена в хорионе, амнионе и стромальных клетках. СЭФР определяли в течение лакунарной стадии во всех эпителиальных клетках эндометрия, тогда как ФРП обнаруживали только в отдельных участках эпителия в непосредственной близости от места имплантации. По мере развития беременности экспрессия СЭФР на клетках покровного и железистого эпителия увеличивалась, а экспрессия ФРП оставалась неизменной. В децидуальных клетках в течение лакунарной стадии выявлялся очень низкий уровень факторов роста. Их экспрессия значительно увеличивалась в стадию имплантации [29]. Уже с преимплантационного периода ряд факторов роста начинает проявлять эмбриотро фическую активность. Наличие ТФР-a и внутриклеточного домена к рецептору ЭФР показано у 4-клеточного эмбриона. У 8- и 14-клеточных эмбрионов обнаружены ТФР-a, внутри- и внеклеточные домены к рецептору ЭФР, ИФР-1 и его рецептор [3]. Секреция ТФР-b значительно увеличивается в эмбрионе овцы с 12-го по 16-й день беременности, тогда как уровень этого ростового фактора остается стабильным в культуре эндометрия. Предполагают, что продукция ТФР-b эмбрионом развивается после материнского "распознавания" беременности и совпадает по срокам с имплантацией [3]. Показано, что семейство ТФР-b играет важную роль в имплантации, обеспечивая рецептивность эндометрия в отношении бластоцисты. Введение ТФР-b в среду инкубации в диапазоне концентраций 1—10 нг/мл достоверно влияло на стадии адгезии бластоцисты и инвазии трофобласта [77]. ТФР-b играют специфическую роль в течение периода, связанного с имплантацией. Предполагается, что децидуальный ТФР-b материнского происхождения может подавлять избыточную инвазию трофобласта, поскольку продемонстрирована его способность дифференциации цитотрофобластов человека в неинвазивный фенотип [5, 17]. Установлено , что увеличение экспрессии ТФР-b и снижение экспрессии ЛИФ и СЭФР в клетках железистого эпителия эндометрия, но не стромы, экспериментально моделируется введением антагониста прогестерона мифепристона (RU486) на 2-й день после овуляции у приматов. Введение мифепристона макакам резус в раннюю секреторную фазу цикла вызывало у них ингибирование имплантации бластоцисты [28]. В последние годы интенсивно разрабатывает ся направление, касающееся изучения юкстак ринной регуляции (при контакте клеток друг с другом) посредством ТФР-a в клетках человеческого эндометрия при имплантации [19]. Показано, что трансмембранная форма ТФР-a эпителия матки воздействовала на рецептор ЭФР мышиной бластоцисты при прямом межклеточ ном контакте. Индукция и пик синтеза ТФР-a в мембранах эпителия матки совпадали по времени с периодом имплантации и, кроме того, были сопряжены с соответствующим ростом экспрессии рецептора ЭФР на бластоцисте. Для человека получены аналогичные данные [19]. Кроме того, обнаружены циклические изменения экспрессии ТФР-a в эндометрии в секреторной фазе цикла. При связывании ТФР-a с рецептором ЭФР развивается два вида ответа: митогенный и активация внутриклеточных сигнальных путей. Такая двунаправленность сигнала имеет важное значение в репродукции человека. Так, при экспрессии эмбрионом рецепторов ЭФР, способного взаимодействовать с ТФР-a эндометрия материнского организма, во-первых, стимулируют ся рост и дифференцировка эмбриона, а во-вторых, активируется митогенный сигнал в клетках эндометрия, где происходит инвазия. Предполагают, что аналогичный тип двунаправленной регуляции срабатывает и в случае циклических изменений регенерации эндометрия. В целом для понимания процессов имплантации и циклических изменений в эндометрии важна расшифровка механизма, за счет которого происходит взаимодействие ТФР-a с рецептором — в растворимой форме или в виде полноцепочеч ного трансмембранного белка. Если эндометри альный ТФР-a играет определенную роль в подготовке эмбриона и/или эндометрия к имплантации, это может происходить двумя путями. С одной стороны, путем высвобождения растворимой формы ТФР-a, а с другой — при прямом контакте трансмембранной формы ТФР-a на клетках эндометрия и рецептором ЭФР эмбриона или эндометриальных клеток. У человека более вероятен второй из рассмотренных механизмов [19]. Иммуногистохимическое определение ТФР-a в клетках матки в периимплантационном периоде обнаруживает различную интенсивность его экспрессии в клетках покровного и железистого эпителия, в клетках стромы и миометрии. После завершения имплантации децидуаль ные клетки и эмбрион также начинают экспрессировать этот ростовой фактор. О значении ТФР-a в процессе имплантации свидетельствуют следующие экспериментальные данные. Внутриматочная инъекция анти-ТФР-a-антител на 5-й день после овуляции у крыс снижала количество грызунов с успешно завершившейся имплантацией. Введение ТФР-a на 5-й день псевдоберемен ности вызывало значительно большую децидуальную реакцию, чем в контрольной группе беременных животных. Сочетанное введение ТФР-a и прогестерона было достаточно для успешной имплантации у 50% крыс с удаленными яичниками [76]. Одним из эмбриональных аутокринных ростовых факторов и факторов, поддерживающих выживание клеток, является фактор роста тромбоцитов (ФРТ). Он действует в преимплантаци онный период через рецепторы эмбриона, сопряженные с гуанозинтрифосфатсвязывающими белками. Максимальная экспрессия рецепторов ФРТ определяется на самых ранних стадиях развития эмбриона - двух- и четырехклеточной [58]. Одной из причин низкого имплантационно го потенциала эмбрионов, получаемых в программах ЭКО, считают нарушение экспрессии эмбриональных рецепторов ФРТ, в результате чего выживаемость эмбрионов понижается из-за дефицита аутокринной стимуляции [73]. Предполагают, что уровень секреции ФРТ может быть прогностическим маркером успешности имплантации и качества полученных эмбрионов в программе ЭКО [58]. При имплантации в клетках эндометрия выявлена экспрессия фактора роста кератиноцитов (ФРК). Последний принадлежит к семейству ФРФ, является выраженным паракринным регулятором, продуцируется стромальными клетками, но действует преимущественно на эпителиальные клетки эндометрия, которые имеют к нему соответствующие рецепторы. Рецепторы этого фактора роста обнаружива ются также на бластоцисте и эмбрионах на более поздней стадии развития, имплантирующихся in vitro, что, по мнению авторов, подтверждает существование паракринного контроля имплантации [30]. В экспериментах in vitro показано, что ФРК является мощным митогеном, действующим как мезенхимальный медиатор роста, дифференци ровки и морфогенеза эпителиальных клеток. Избыточная экспрессия ФРК in vivo вызывает гиперплазию эпителиальных тканей в различных органах. В репродуктивной системе уровень ФРК регулируется циркулирующими гормонами, в частности, его секреция увеличивается в периоды интенсивного роста клеток [30]. Во время фаз аппозиции и адгезии бластоцисты важное значение имеет ЛИФ, цитокин, вовлеченный в регуляцию гемопоэза, эмбриогене за, имплантации. Установлено, что ген gp49B1, чья транскрипция индуцировалась посредством паракринного и аутокринного влияния ЛИФ, обнаруживался в матке мышей, в основном в клетках эпителия, незадолго до имплантации. Интересно, что в тучных клетках продукт этого гена выполнял функцию поверхностного рецептора ЛИФ с ингибиторной активностью, что позволяет предположить наличие у него функций иммунорецептора, обеспечивающего присоединение бластоцисты [55]. ЛИФ оказывает множественное пролифера тивное и дифференцирующее действие, помимо эмбриональных и эндотелиальных клеток, на гематопоэтические клетки и остеобласты [5]. У мышей экспрессия мРНК ЛИФ увеличива ется в эндометриальных железах непосредствен но перед имплантацией, на 4-й день после овуляции, что регулируется факторами материнского организма. У нокаутных по этому гену мышей процессы оогенеза и оплодотворения не нарушены, однако образовавшиеся бластоцисты не способны к имплантации. Перенос выделенных бластоцист нормальным по гену ЛИФ самкам приводил к развитию у них беременности [5]. У человека мРНК ЛИФ и уровень его в эндометрии монотонно возрастает начиная с середины поздней секреторной фазы. ЛИФ локализован в железистом эпителии, также обнаружен в бластоцисте человека [38]. Колониестимулирующий фактор (КСФ) обеспечивает пролиферацию и дифференцировку мононуклеарных фагоцитирующих клеток и участвует в процессе имплантации, взаимодействуя с рецептором КСФ эмбриона. По другим данным, введение КСФ может оказывать неблагоприятное действие на имплантацию и редуцировать выживаемость эмбриона. Эпителий матки и цитотрофобласт - основные места синтеза КСФ. Рецепторы к КСФ обнаружены на эндометриальных клетках и преимплантационных эмбрионах [44]. В течение периимплантационного периода в тканях эндометрия, помимо ростовых факторов, присутствует широкий перечень белков, проявляющих свои эффекты паракринным, юкстакрин ным и аутокринным путем. Их функции и точная роль в процессе имплантации в настоящий момент неизвестны [44]. В секреторном эндометрии продемонстриро вана экспрессия лептина и рецептора лептина. Одновременно эндометрий является тканью-"ми шенью" для циркулирующего в кровотоке лептина. Установлено, что секреция лептина эпителиальными клетками эндометрия регулировалась в экспериментах in vitro бластоцистой и эмбрионом на более поздних стадиях развития. Данный факт позволяет предположить участие лептина в регуляции имплантации, что требует дальнейшего изучения [32]. Плацентарный белок РР14 секретируется эндометриальными железами во второй половине лютеиновой фазы цикла и на ранних этапах I триместра беременности. Он синтезируется под влиянием прогестерона и секретируется в полость матки. РР14 ингибирует пролиферацию лимфоцитов, подавляет активность естественных киллеров, количество которых очень велико в эндометрии на раннем этапе беременности. Предполагается, что РР14 защищает имплантирующий ся эмбрион от отторжения иммунной системой материнского организма [44]. Гепаринсульфат протеогликан — соединение, вовлеченное в фазу адгезии при имплантации. В человеческом эндометрии в течение лютеиновой фазы цикла присутствует на базальной мембране сосудов и желез. Дополнительно экспрессиру ется, когда стромальные клетки полностью трансформируются в предецидуальные. Рецепторы к гепаринсульфат протеогликану обнаружены на апикальной мембране поверхностных эпителиаль ных клеток и на внешней поверхности бластоцисты при приобретении ей адгезионной компетентности in vitro и in vivo [44]. Таким образом, процесс имплантации контролируется сложнейшим взаимодействием множества сигнальных и эффекторных соединений, вырабатываемых эндометрием, иммунокомпе тентными клетками матери и эмбрионом, принимающим активное участие в последовательном каскаде событий. Однако собственно имплантации предшествуют определенные процессы, развивающиеся в эндометрии в секреторной фазе цикла. В соответствии с этим представлением, реакция эндометрия в ходе имплантации делится на три фазы [25]: 1. Первая фаза. Находится под контролем эстрогенов и прогестерона и характеризуется изменениями в покровных и железистых эпителиаль ных клетках эндометрия, результатом чего является подготовка к аппозиции и присоединению бластоцисты. Гормональные влияния на эндометрий зависят от присутствия ядерных рецепторов к стероидным гормонам. Нарастание концентра ции рецепторов наблюдается в направлении от функционального слоя к базальному, что коррелирует с установлением максимальной рецептивности матки, необходимой для имплантации. Параллельно с изменениями в системе стероидных рецепторов клетки эпителия претерпевают изменения в структуре цитоскелета и профиле секреции белков. Эти изменения могут быть предотвращены антагонистами прогестероновых рецепторов в лютеиновой фазе цикла. 2. Вторая фаза. Модуляция гормональных стероидных эффектов эмбриональными факторами. Начало секреции бластоцистой хорионического гонадотропина и других белков ранней беременности вызывает дополнительные изменения в клетках эндометрия. В клетках покровного эпителия происходит эндорепликация, образуются "эпителиальные бляшки". Железистый эпителий отвечает на действие эмбриональных регулятор ных факторов модификацией главного секреторного продукта - гликоделина, дающего иммунный протекторный эффект в отношении наступающей беременности. Стромальные фибробласты начинают процесс своей дифференцировки, приобретают децидуальный фенотип, начинают экспрессировать актиновые филаменты. 3. Третья фаза. Инвазия трофобласта и перестройка стромального компонента эндометрия, гладкомышечных клеток, эндотелия кровеносных сосудов. При этом на покровном эпителии исчезают "эпителиальные бляшки", железистый эпителий остается высоко секреторно активным. В этой фазе заканчивается трансформация фибробластов в децидуальные клетки, которые начинают экспрессировать весь комплекс ростовых факторов, свойственных ранней беременности. Хорошими маркерами эндометриальной функции и готовности эндометрия к имплантации являются адгезионные молекулы, роль которых в регуляции имплантации стала интенсивно изучаться в последние годы. К молекулам адгезии относятся 4 семейства белков: интегрины, кадгерины, селектины и семейство иммуноглобулинов. Интегрины (a- и b- цепи) взаимодействуют с различными лигандами, включая гликопротеины внеклеточного матрикса и молекулы на клеточных мембранах. Они облегчают миграцию и прикрепление клеток к матриксу, опосредуют межклеточные взаимодей ствия, передачу сигналов [13]. Интегрины вовлечены в процессы оплодотво рения, имплантации и развития плаценты. Эндометрий относится к тканям с высоким уровнем экспрессии интегринов [85]. В пролифератив ной и секреторной фазах цикла клетки железистого и покровного эпителия экспрессируют различные виды интегринов. Предполагают, что присутствие в эпителии трех типов из них — a1b1, a4b1, avb3 только в течение 20-24 дней цикла облегчает иммунологическое распознавание эмбриона и обеспечивает удачную имплантацию [13]. Изменение экспрессии интегринов обнаружено в эндометрии женщин с нарушениями репродуктивной функции. Показано отсутствие экспрессии b3-интегрина у женщин с эндометрио зом и при повторных неудачных попытках ЭКО [14]. В процессе имплантации обмен сигналами между эмбрионом и эндометрием осуществляет в том числе посредством молекул адгезии. Интересно, что добавление некоторых молекул адгезии в культуральную среду улучшало качество эмбрионов и повышало частоту имплантации и наступления беременности в программе ЭКО [26, 75]. Клеточная адгезия — важнейший регулятор апоптоза. Индукция апоптоза за счет нарушения взаимодействия клеток с субстратом особенно хорошо проявляется в эндотелиальных и эпителиальных клетках. Показано, что и менее радикальные изменения в структуре интегринов могут влиять на развитие апоптоза. Несмотря на достигнутые успехи в понимании некоторых механизмов имплантации, до сих пор остается невыясненным ряд вопросов, касающихся регуляции последовательности событий в секреторном эндометрии и установлении взаимодействия между развивающимся эмбрионом и рецептивным эндометрием. Мы только начинаем понимать механизмы действия ряда гуморальных факторов и эффекторных молекул в регуляции такого рода взаимоотношений. Несомненно, решение этих вопросов позволит значительно продвинуться в оптимизации существующих и создании новых методов преодоления бесплодия. Литература 1. Алексеева М.Л., Адамян Л.В., Кондриков Н.И. и др. Стероид-рецепторные системы в эндометрии и эндометриоидных гетеротопиях ретроцервикальной локализации. Акуш и гин 1988;4:69-71. 2. Бурлев В.А., Гаспаров А.С., Аванесян Н.С. и др. Факторы роста и их роль в регуляции репродуктивной функции у больных с синдромом поликистозных яичников. Пробл репрод 1998;3:17-25. 3. Бурлев В.А., Павлович С.В. Ангиогенез и ангиогенные факторы роста в регуляции репродуктивной системы у женщин. Пробл репрод 1999; 5:6-14. 4. Гузов И.И. Введение в медицину репродукции. Зачатие у человека. Стероидные гормоны и другие медиаторы имплантации. Введение в рецепторологию. www.center-reproduction.ru 5. Гьюдайс Линда С. Имплантирующаяся оплодотворенная яйцеклетка и материнский организм. Пробл эндокринол 1999;5:30-32. 6. Минина Л.С., Волков Н.И., Новиков Е.А., Алексеева М.Л. Эстроген- и прогестерон-рецепторные системы в эндометрии больных с "малыми" формами эндометриоза. Акуш и гин 1988;4:71-73. 7. Побединский Н.М., Балтуцкая О.И., Омельяненко А.И. Стероидные рецепторы нормального эндометрия. Акуш и гин 2000;3:5-8. 8. Потин В.В., Воробьева О.А. Современные представления о роли факторов роста в системе внутритканевых регуляторов репродукции. Пробл эндокринол 1993;39:4:58—62. 9. Программированная клеточная гибель. Под ред. В.С.Новикова. Ст-Петербург: Наука 1996;77. 10. Сергеев П.В., Ткачева Н.Ю., Карева Е.Н., Высоцкий М.М. Прогестерон: рецепторный механизм действия в норме и при опухолевом росте. Акуш и гин 1994;5:6-8. 11. Чернуха Г.Е., Сметник В.П. Роль факторов роста в функции репродуктивной системы. Пробл репрод 1996;2:8-13. 12. Acosta A.A., Elberger L., Borghi M. et al. Endometrial dating and determination of the window of implantation in healthy fertile women. Fertil Steril 2000;73:4:788-798. 13. Aplin A.E., Howe A., Alahari S.K., Juliano R.L. Signal transduction and signal modulation by cell adhesion receptors: the role of integrins, cadherins, immunoglobulin-cell adhesion molecules, and selectins. Pharmacol Rev 1998;50: 197-263. 14. Asahina T., Kobayashi T., Okada Y. Studies of the role of adhesive proteins in maintaining pregnancy. Hormon Res 1998;50:37-45. 15. Bany B.M., Zhang X., Kennedy T.G. Regulation of plasminogen activator in rat endometrial stromal cells: the role of epidermal growth factor. Mol Reprod Develop 1998;50:63-69. 16. Beato M. Transcriptional control by nuclear receptors. FASEB J 1991;4:5: 2044-2051. 17. Bischof P., Meisser A., Campana A. Mechanisms of endometrial control of trophoblast invasion. J Reprod Fertil 2000;55:Suppl:65-71. 18. Bression D., Michard M., LeDafniet M. et al. Evidence for a specific estradiol binding site on rat pituitary membranes. Endocrinology 1986;119:1048-1051. 19. Bush M.R., Mele J.M., Couchman G.M., Walmer D.K. Evidence of yuxtacrine signaling for transforming growth factor-a in human endometrium. Biol Reprod 1998;59:1522-1529. 20. Chen D., Ganapathy P., Zhu L.-J. et al. Potential regulation of membrane trafficking by estrogen receptor a via induction of Rab11 in uterine glands during implantation. Mol Endocrinol 1999;13:6:993-1004. 21. Dahmoun M., Boman K., Cajander S. et al. Apoptosis, proliferation, and sex hormone receptors in superficial parts of human endometrium at the end of the secretory phase. J Clin Endocrinol Metab 1999;84:1737-1743. 22. Damario M.A., Liu H.C., Mele C.A. et al. Immunohistochemical analysis of insulin-like growth factor-binding proteins -1, -2, -3 in implantation sites of the mouse. J Ass Reprod Genet 1998;15:8:513-520. 23. De La Fuente R., O'Brien M.J., Eppig J.J. Epidermal growth factor enhances preimplantation developmental competence of maturing mouse oocytes. Hum Reprod 1999;14:12:3060—3068. 24. Dhara S., Lalitkumar P.G.L., Sengupta J., Ghosh D. Immunohistochemical localization of insulin-like growth factors I and II at the primary implantation site in the Rhesus monkey. Mol Hum Reprod 2001;7:365-371. 25. Fazleabas A.T., Kim J.J., Srinivasan S. et al. Implantation in the baboon: endometrial responses. Semin Reprod Endocrinol 1999;17:3:257-265. 26. Fujimoto J., Sakaguchi H., Hirose R., Tamaya T. Significance of sex steroids in roles of cadherin subfamily and its related proteins in the uterine endometrium and placenta. Horm Res 1998;50:30-36. 27. Gao J., Mazella J., Tang M., Tseng L. Ligand-activated progesterone receptor isoform hPR-A is a stronger transactivator than hPR-B for the expression of IGFBP-1 (Insulin-like growth factor binding protein-1) in human endometrial stromal cells. Mol Endocrinol 2000;14:12:1954-1961. 28. Ghosh D., Kumar P.G.L.L., Sengupta J. Effect of early luteal phase administration of mifepristone (RU486) on leukaemia inhibitory factor, transforming growth factor b and vascular endothelial growth factor in the implantation stage endometrium of the rhesus monkey. J Endocrinol 1998;157:1:115-125. 29. Ghosh D., Sharkey A., Charnock-Jones et al. Expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and placental growth factor (PlGF) in conceptus and endometrium during implantation in the rhesus monkey. Mol Hum Reprod 2000;6:10:935-941. 30. Gillis P., Savla U., Volpert O.V. et al. Keratinocyte growth factor induces angiogenesis and protects endothelial barrier function. J Cell Science 1999;112:2049-2057. 31. Giudice L.C. Potential biochemical markers of uterine receptivity. Hum Reprod 1999;14:2:3-16. 32. Gonzalez R.R., Caballero-Campo P., Jasper M. et al. Leptin and leptin receptor are expressed in the human endometrium and endometrial leptin secretion is regulated by the human blastocyst. J Clin Endocrinol Metab 2000;85:4883-4888. 33. Gregory L. Ovarian markers of implantation potential in assisted reproduction. Hum Reprod 1998;13:4:117-132. 34. Hadcock J.R., Malbon C.C. Regulation of receptor expression by agonists: transcriptional and post-transcriptional control. Trends Neurosci 1991; 14:242-247. 35. Hernandez E.R. Embryo implantation and GnRH antagonists. Part 1: Embryo implantation: the Rubicon for GnRH antagonists. Hum Reprod 2000;15:6:1211-1216. 36. Huang H.-Y., Wen Y., Irwin J.C. et al. Cytokine-mediated regulation of 92-kilodalton type IV collagenase, tissue inhibitor of metalloproteinase-1 (TIMP-1), and TIMP-3 messenger ribonucleic acid expression in human endometrial stromal cells. J Clin Endocrinol Metab 1998;83:1721-1729. 37. Inoue T., Kanzaki H., Imai K. et al. Progesterone stimulates the induction of human endometrial CD56+ lymphocytes in an in vitro culture system. J Clin Endocrinol Metab 1996;81:1502-1507. 38. Johnson P.M., Christmas S.E., Vince G.S. Immunological aspects of implantation and implantation failure. Hum Reprod 1999;14:2:26-36. 39. Jones R.K., Searle R.F., Stewart J.A. et al. Apoptosis, bcl-2 expression, and proliferative activity in human endometrial stroma and endometrial granulated lymphocytes. Biol Reprod 1998;58:995-1002. 40. Kamijo T., Rajabi M.R., Mizunuma H., Ibuki Y. Biochemical evidence for autocrine/paracrine regulation of apoptosis in cultured uterine epithelial cells during mouse embryo implantation in vitro. Mol Hum Reprod 1998;4:10:990- 998. 41. Kauma S.W. Cytokines in implantation. J Reprod Fertil 2000; 55: Suppl:31-42. 42. Keller N.R., Sierra-Rivera E., Eisenberg E., Osteen K.G. Progesterone exposure prevents matrix metalloproteinase-3 (MMP-3) stimulation by interleukin-1a in human endometrial stromal cells. J Clin Endocrinol Metab 2000;85:1611- 1619. 43. Kim C.H., Chae H.D., Cheon Y.P. et al. The effect of epidermal growth factor on the preimplantation development, implantation and its receptor expression in mouse embryos. J Obstet Gynaecol Res 1999;25:2:87-93. 44. Klentzeris L.D. The role of endometrium in implantation. Hum Reprod 1997;12:170-175. 45. Klonisch T., Wolf P., Hombach-Klonisch S. et al. Epidermal growth factor-like ligands and erbB genes in the periimplantation rabbit uterus and blastocyst. Biol Reprod 2001;64:1835-1844. 46. Koga K., Osuga Y., Tsutsumi O. et al. Increased concentrations of soluble tumour necrosis factor receptor (sTNFR) I and II in peritoneal fluid from women with endometriosis. Mol Hum Reprod 2000;6:929—933. 47. Kokawa K., Shikone T., Nakano R. Apoptosis in the human uterine endometrium during the menstrual cycle. J Clin Endocrinol Metab 1996;81:4144— 4147. 48. Kol S., Ben-Shlomo I., Ando M., Adashi E.Y. Insulin-like growth factor I affects the intraovarian interleukin-1 system: evidence for suppression of type I interleukin-1 receptor expression and enhancement of secretory phospholipase A2 expression and activity. Mol Hum Reprod 1997;3:1095-1099. 49. Konno R., Yamakawa H., Utsunomiya H. et al. Expression of survivin and Bcl-2 in the normal human endometrium. Mol Hum Reprod 2000;6:6:529—534. 50. Kumar S., Zhu L.-J., Polihronis M. et al. Progesterone induces calcitonin gene expression in human endometrium within the putative window of implantation. J Clin Endocrinol Metab 1998;83:4443—4450. 51. Lee C.Y., Green M.L., Simmen R.C., Simmen F.A. Proteolysis of insulin-like growth factor-binding proteins (IGFBPs) within the pig uterine lumen associated with peri-implantation conceptus development. J Reprod Fertil 1998; 112:2:369-377. 52. Lecce G., Meduri G., Ancelin M. et al. Presence of estrogen receptor b in the human endometrium through the cycle: expression in glandular, stromal, and vascular cells. J Clin Endocrinol Metab 2001;86:1379-1386. 53. Majewska M.D., Demirgoren S., London E.D. Binding of pregnenolone sulfate to rat brain membranes suggests multiple sites of steroid action at the GABAA receptor. Eur J Pharmacol 1990;189:307-315. 54. Mandler R.N., Seamer L.C., Domalewski M.D., Bankhurst A.D. Progesterone but not estrogen depolarizes natural killer cells. Nat Immunol 1993; 12:128-135. 55. Matsumoto Y., Handa S., Taki T. Gp49B1, an inhibitory signaling receptor gene of hematopoietic cells is induced by leukemia inhibitory factor in the uterine endometrium just before implantation. Dev Growth Differ 1997;39:5: 591-597. 56. Morsi H.M., Leers M.P., Radespiel-Troger M. et al. Apoptosis, bcl-2 expression, and proliferation in benign and malignant endometrial epithelium: an approach using multiparameter flow cytometry. Gynecol Oncol 2000;77:1:11-17. 57. Nakamura H., Nakamura K., Yodoi J. Redox regulation of cellular activation. Ann Rev Immunol 1997;15:351-369. 58. Nakatsuka M., Yoshida N., Kudo T. Platelet activating factor in culture media as an indicator of human embryonic development after in vitro fertilization. Hum Reprod 1992;7:1435-1439. 59. Nuttall R.K., Kennedy T.G. Epidermal growth factor and basic fibroblast growth factor increase the production of matrix metalloproteinases during in vitro decidualization of rat endometrial stromal cells. Endocrinology 2000; 141:629-636. 60. Oehler M.K., Rees M.C., Bicknell R. Steroids and the endometrium. Curr Med Chem 2000;7:5:543-560. 61. Paria B.C., Ma W., Tan J. et al. Cellular and molecular responses of the uterus to embryo implantation can be elicited by locally applied growth factors. Proc Natl Acad Sci USA 2001;98:3:1047-1052. 62. Pecci A., Scholz A., Pelster D., Beato M. Progestins prevent apoptosis in a rat endometrial cell line and increase the ratio of bcl-XL to bcl-XS. J Biol Chem 1997;272:11791-11798. 63. Pierro E., Minici F., Alesiani O. et al. Stromal-epithelial interactions modulate estrogen responsiveness in normal human endometrium. Biol Reprod 2001;64:831-838. 64. Pietras R.J., Szego C.M. Specific binding sites for oestrogen at the outer surfaces of isolated endometrial cells. Nature 1977;265:69-72. 65. Piva M., Flieger O., Rider V. Growth factor control of cultured rat uterine stromal cell proliferation is progesterone dependent. Biol Reprod 1996;55: 1333-1342. 66. Remohi J., Ardiles G., Garcia-Velasco J.A. et al. Endometrial thickness and serum oestradiol concentrations as predictors of outcome in oocyte donation. Hum Reprod 1997;12:2271-2276. 67. Roy S.K., Terada D.M. Activities of glucose metabolic enzymes in human preantral follicles: in vitro modulation by follicle-stimulating hormone, luteinizing hormone, epidermal growth factor, insulin-like growth factor I, and transforming growth factor b1. Biol Reprod 1999;60:763-768. 68. Rutanen E.M., Salmi A., Nyman T. mRNA expression of insulin-like growth factor-I (IGF-I) is suppressed and those of IGF-II and IGF-binding protein-1 are constantly expressed in the endometrium during use of an intrauterine levonorgestrel system. Mol Hum Reprod 1997;3:749-754. 69. Simon C., Martin J.C., Galan A. et al. Embryonic regulation in implantation. Semin Reprod Endocrinol 1999;17:3:267-274. 70. Simon C., Martin J.C., Pellicer A. Paracrine regulators of implantation. Bailliere's Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol 2000;14:5:815-826. 71. Sharkey A. Cytokines and implantation. Rev Reprod 1998;3:1:52-61. 72. Slater M., Murphy C.R. Differential expression of insulin-like growth factors in the uterine epithelium and extracellular matrix during early pregnancy. Matrix Biol 1999;18:6:579-584. 73. Stojanov T., O'Neill C.O. Ontogeny of expression of a receptor for platelet-activating factor in mouse preimplantation embryos and the effects of fertilization and culture in vitro on its expression. Biol Reprod 1999;60:674-682. 74. Surveyor G.A., Wilson A.K., Brigstock D.R. Localization of connective tissue growth factor during the period of embryo implantation in the mouse. Biol Reprod 1998;59:5:1207-1213. 75. Taga M., Suginami H. Cell adhesion and reproduction. Horm Res 1998;50:2-6. 76. Tamada H., Sakamoto M., Sakaguchi H. et al. Evidence for the involvement of transforming growth factor-alpha in implantation in the rat. Life Sci 1997;60:17:1515-1522. 77. Taniguchi F., Harada T., Yoshida S. et al. Paracrine effects of bFGF and KGF on the process of mouse blastocyst implantation. Mol Reprod Dev 1998; 50:1:54-62. 78. Tao X.-J., Tilly K.I., Maravei D.V. et al. Differential expression of members of the bcl-2 gene family in proliferative and secretory human endometrium: glandular epithelial cell apoptosis is associated with increased expression of bax. J Clin Endocrinol Metab 1997;82:2738-2746. 79. Terasik J., Mendoza C. Nongenomic effects of 17b-estradiol on maturing human oocytes: relationship to oocyte developmental potential. J Clin Endocrinol Metab 1995;80:1438-1443. 80. Terasik J., Moos J., Mendoza C. Stimulation of protein tyrosine phosphorylation by a progesterone receptor on the cell surface of human sperm. Endocrinology 1993;133:328-335. 81. Vassiliadou N., Bulmer J.N. Functional studies of human decidua in spontaneous early pregnancy loss: effect of soluble factors and purified CD56+ lymphocytes on killing of natural killer- and lymphokine-activated killer-sensitive targets. Biol Reprod 1998;58:982-987. 82. Vedeckis W.V. Nuclear receptors, transcriptional regulation, and oncogenesis. Proc Soc Experim Biol Med 1992;199:1-12. 83. Wehling M. Looking beyond the dogma of genomic steroid action: insights and facts of the 1990s. Mol Med 1995;73:439—447. 84. Wu W.X., Derks J.B., Zhang Q., Nathanielsz P.W. Changes in heat shock protein - 90 and -70 messenger ribonucleic acid in uterine tissues of the ewe in relation to parturition and regulation by estradiol and progesterone. Endocrinology 1996;137:5685-5693. 85. Yoshimura Y., Miyakoshi K., Hamatani T. et al. Role of b1 integrins in human endometrium and decidua during implantation. Horm Res 1998;50:46-55. А.В. Светлаков, М.В. Яманова, А.Б. Егорова, С.В. Михуткина Красноярская государственная медицинская академия; Центр репродуктивной медицины, Красноярск |