Итоги функционирования криобанка спермы человека в Нижнем Новгороде

Наличие запаса криоконсервированных репродуктивных клеток определяет результативность клинической работы по лечению бесплодия. В то же время криобанки спермиев человека способны функционировать лишь при наличии надежных способов замораживания клеточной суспензии. Криобанк спермы человека при ВРТ облегчает подбор эякулята по фенотипическим признакам, группе крови, резус фактору и упрощает процедуру при необходимости повторных лечебных манипуляций. Эффективность искусствен ной инсеминации криоконсервированной спермой во многом зависит от степени сохранности морфофункциональных свойств клеток после размораживания. Под морфофункциональными свойствами спермиев человека следует прежде всего понимать сохранность акросомального аппарата (активность акрозина, гиалуронидазы, целостность цитоплазматической мембраны), а также такой уровень подвижности, который обеспечит спермиям максимальную оплодотворяю щую способность после размораживания. В ходе исследований в Институте проблем криобиологии и криомедицины Национальной академии наук Украины (ИПКиК НАН) под руководством акад. В.И. Грищенко был разработан и внедрен в практику способ сверхбыстрого охлаждения спермиев человека [1, 2, 4]. Отличие этого способа замораживания от стандартных методов криоконсервации заключается в сочетанном действии полифункционального криоконсерванта с низким, безвредным содержанием химических компонентов и оптимального режима охлаждения (3000 К/мин) в металлических контейнерах из пищевой алюминиевой фольги, прямоугольной формы, нетоксичных, апирогенных, одноразового использования. Следует осо бо отметить, что данный способ является безотмывочным и позволяет замораживать спермии при олигоастеноспермии с последующей стимуляцией клеток после отогрева [5]. С 1989 г. в Нижнем Новгороде на базе Областного медицинского центра планирования семьи и репродукции (ОМЦ ПЛАСИР) функциониру ет криобанк донорской спермы. За период 1989—2001 гг. охвачено около 9000 женщин, которым по показаниям была проведена искусственная инсеминация криоконсервированной спермой донора (ИОСД), в которой они нуждались. Материал и методы Образцы спермы получены от мужчин в возрасте до 35 лет, обследованных по стандартной схеме. В карту донора заносились фенотипические признаки, результаты общеклинических обследований. Дополнительно проводилось кариотипи рование, консультирование генетиком, психиатром, наркологом. Во всех случаях использова ли эякуляты с наличием не менее 60% активноподвижных, морфологически полноценных спермиев. Перед замораживанием контейнеры стерилизовали в сушильном шкафу при 160 °С в течение 1,5 ч. Маркировка проводилась по внешней стороне контейнера. Размораживание осуществля ли на водяной бане при 41 °С в течение 20—30 с. Использовался внутриматочный способ введения спермы. Забеременевшие женщины состояли на учете в ОМЦ ПЛАСИР и женской консультации по месту жительства. Во всех случаях проводился мониторинг контроля состояния женщин. Рожденным детям проводился общий осмотр и обязательно давалось заключение невропатолога и педиатра. Возраст и состояние репродуктивного здоровья пациенток Результаты и обсуждение Все женщины были разделены на 3 возрастные группы (см. таблицу). С увеличением возраста время, прошедшее с момента вступления в брак до обращения в медицинский центр, возрастало. Общая продолжительность бесплодия по возрастным группам представлена на рис. 1, А. Женщины в возрасте старше 35 лет обращались в центр либо в течение первых 2 лет бесплодия, либо после 5 лет и более. Данные о продолжительности бесплодия в браке до обращения в центр представлены на рис. 1, Б. Анализ анамнестических данных свидетельству ет о том, что проводимое ранее обследование носило чаще всего бессистемный характер и включало лишь сбор анамнеза, гинекологический осмотр (в 100% случаев), измерение ректальной температуры (18—20%) и УЗИ (15—20%), тогда как гистеросальпингография была выполнена в 15%, а лапароскопия в 3,3% случаев до обращения в ОМЦ ПЛАСИР. Рис. 1. Общая продолжительность бесплодия по возрастным группам (А) и продолжительность бесплодия в браке до обращения в центр (Б). Рис. 2. Частота беременности после ИОСД. Рис. 3. Исходы беременности после ИОСД. Частота наступления беременности после ИОСД представлена на рис. 2. Как видно на рис. 2, беременность наступала в основном после 1—2 курсов во всех возрастных группах. Необходимость в 5 и более курсах процедур была в основном у женщин в возрасте старше 35 лет. Следует отметить тенденцию к снижению числа попыток ИОСД с уменьшением возраста пациенток. На рис. 3 представлены данные об исходах беременности после ИОСД. Видно, что беременность и роды у женщин протекали удовлетвори тельно. Следует отметить отсутствие преждевре менных родов в группе пациенток в возрасте старше 35 лет, что связано с их психологическими особенностями, большей дисциплинированно стью и более серьезным отношением к беременности, соблюдением рекомендаций лечащего врача. Такое отношение привело к большей частоте положительных результатов обследования, подготовки к процедуре ИОСД. Данные литературы указывают на то, что в естественной популяции мальчики рождаются в 51,2% случаев, а девочки в 49,1% [3]. По результатам наших исследований, после оплодотворения криоконсервированной спермой мальчики рождались в 47% случаев, а девочки в 53%. Причем в возрастной группе женщин до 25 лет рождались преимущественно девочки. У женщин старше 35 лет, напротив, чаще рождались мальчики, а средняя возрастная категория имела одинаковое соотношение полов новорожден ных. Мы полагаем, что в процессе заморажива ния-оттаивания имеют место некоторые изменения в Y-спермиях, приводящие к снижению их оплодотворяющей способности. Возможно, среди Y-спермиев уменьшается число активно-под вижных клеток при криоконсервации, что, однако, не имеет особого значения, так как проводилась внутриматочная инсеминация, которая исключает на 90% трудности, связанные с преодолением спермиями селективных барьеров женского репродуктивного тракта, а также снимает иммунологический барьер [6]. С другой стороны, возможно нарушение акросомального аппарата в той степени, которая снижает оплодотворяю щую способность популяции этих клеток. Выяснение причин отмеченного нами явления требует дальнейшего изучения. Оценка состояния здоровья детей после рождения не выявила различий в их индивидуаль ном развитии и заболеваемости по сравнению с детьми, рожденными после естественного зачатия. Врожденных аномалий развития не наблюдалось. Более того, дети, рожденные при помощи ИОСД, более здоровы, чем их сверстники, рожденные при естественном зачатии. Мы полагаем, что это связано с селекцией спермиев, которая происходит при замораживании-оттаи вании. Спермии, не устойчивые к холодовому воздействию, погибают, оставляя таким образом наиболее приспособленных, которые участвуют далее в процессе оплодотворения. Выводы 1. Криоконсервация спермы доноров при процедуре ИОСД эффективна в режиме сверхбыстрого охлаждения (3000 К/мин), что обеспечивает ее высокую оплодотворяющую способность за счет сохранения структуры акросомы и восстановление подвижности после размораживания. 2. Обследование женщин, состоящих в браке с мужчинами, страдающими абсолютным бесплодием, показало, что лишь 68,9% из них в возрасте 25 лет можно признать здоровыми, тогда как остальные имеют гинекологические заболевания, которые прогрессируют с возрастом, достигая к 35 годам 78,6%. 3. Использование процедуры ИОСД в качестве объективного критерия оценки фертильности женщин показало, что применение комплексной терапии основных форм женского бесплодия позволяет, как правило, восстановить их репродуктивный потенциал. Литература 1. Грищенко В.И., Калугин Ю.В., Паращук Ю.С., Лучко Н.А., Черныш Е.Н., Тарасов В.Ф., Гальченко С.Е. Способ криоконсервирования спермы человека. А.с. 1660651 РФ, МКИ АОINI/OO; A61B17/36. Б.И. от 07.07.91. 2. Грищенко В.И., Калугин Ю.В., Паращук Ю.С., Лучко Н.А., Черныш Е.Н., Тарасов В.Ф., Гальченко С.Е. Способ низкотемпе ратурного консервирования спермы. Патент 4965186, США. 3. Грищенко В.И., Паращук Ю.С., Дахно Ф.В., Юрченко Г.Г. Криобиология и проблема бесплодия. Киев: Наукова Думка 1990; 136. 4. Грищенко В.И., Калугин Ю.В., Одинцов А.А., Лучко Н.А., Смаглий Н.А., Черныш Е.Н. Криоконсервация спермы в условиях сверхбыстрого охлаждения. "Криоконсервирование репродуктивных клеток и эмбрионов": Сб. научных трудов. Харьков: ИПКиК НАН Украины 1992. 5. Кучков И.Н. Функциональные и биохимические свойства спермиев человека при криоконсервации в условиях сверхбыстрого охлаждения: Автореф. дис. ... канд. биол. наук. Харьков 2000; 17. 6. Одинцов А.А. Патофизиологические аспекты использования криоконсервированной спермы доноров для искусственной инсеминации при лечении бесплодия в браке: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. Нижний Новгород 1998; 27. В.И. Грищенко*, А.А. Одинцов, И.Н. Кучков*, В.Е. Чадаев* Областной медицинский центр планирования семьи и репродукции, Нижний Новгород ; * Институт проблем криобиологии и криомедицины Национальной академии наук Украины, Харьков